本文關(guān)鍵詞：布氏乳桿菌對(duì)斷奶獺兔腸道菌群、TLR2和TLR4基因表達(dá)的影響

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【摘要】：隨著獺兔生產(chǎn)朝著規(guī)�；�、集約化發(fā)展,腹瀉已成為獺兔最主要的疾病之一,給獺兔養(yǎng)殖帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。腹瀉導(dǎo)致獺兔腸道菌群紊亂,腸道失去物理和生物的重要免疫屏障,Toll樣受體(Toll-like Receptor,TLR)識(shí)別和清除微生物入侵的功能同時(shí)也遭到破壞,而益生菌作為生物制劑在防治獺兔腹瀉方面有著巨大的潛力和天然的優(yōu)勢(shì)。因此,本研究就獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸菌群結(jié)構(gòu)變化及斷奶獺兔飼喂布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri,L.buchneri)后腸道菌群結(jié)構(gòu)、TLR2和TLR4基因表達(dá)情況進(jìn)行了研究,結(jié)果如下：1.應(yīng)用PCR-DGGE和Quantitative PCR (qPCR)分析健康獺兔與腹瀉獺兔盲腸菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示,腹瀉獺兔PCR-DGGE圖譜與健康獺兔比較差異不顯著(P0.05),但香農(nóng)指數(shù)(H')、豐富度(Ea)、均勻度(S)腹瀉獺兔均高于健康獺兔,聚類分析和主成分分析(Principal component analysis, PCA)能夠?qū)⒏篂a和健康獺兔區(qū)分為不同的簇。腹瀉獺兔盲腸梭菌類群Ⅳ、梭菌類群XⅣa、白色瘤胃球菌、溶纖維丁酸弧菌和普拉梭桿菌等有益微生物數(shù)量顯著降低(P0.01),而埃希氏大腸桿菌數(shù)量卻顯著升高(P0.05),其他菌屬差異不顯著。表明,獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸有益微生物數(shù)量降低,部分有害微生物數(shù)量升高；腹瀉與健康獺兔菌群結(jié)構(gòu)差異不顯著,腹瀉獺兔盲腸菌群結(jié)構(gòu)有復(fù)雜化的趨勢(shì)。2.日糧中添加1.0×10~4CFU·g~(-1)和1.0×105CFU·g~(-1)L.buchneri對(duì)斷奶獺兔腸道菌群結(jié)構(gòu)、TLR2和TLR4基因表達(dá)的影響。60只斷奶獺兔(對(duì)照組、低劑量組和高劑量組)飼喂4周后,低劑量組獺兔體重總增重和日增重明顯高于對(duì)照組和高劑量組(P0.01),高劑量組與對(duì)照組比較差異不顯著(P0.05)。分別采用PCR-DGGE和qPCR比較各組腸道菌群結(jié)構(gòu)、qPCR分析腸道中TLRs表達(dá)情況、ELISA方法檢測(cè)外周血中細(xì)胞因子含量。結(jié)果顯示,獺兔腸道菌群豐富度從十二指腸到盲腸呈“V”字形變化趨勢(shì),空腸豐富度最低：L.buchneri添加組腸道菌群香農(nóng)指數(shù)(H',十二指腸P0.01、空腸P0.01、盲腸P0.05)、豐富度(Ea,十二指腸P0.01、空腸P0.01、盲腸P0.05)、均勻度(S,十二指腸P0.01、空腸P0.01、盲腸P0.05)顯著增加,而回腸中H、Ea、S只有低劑量組顯著增加(P0.01),高劑量組差異不顯著(P0.05)。低劑量組和高劑量組獺兔空腸總菌(P0.01)、厚壁菌門(P0.01)、擬桿菌門(P0.05)、腸桿菌科(P0.01)、梭菌類群Ⅳ(P0.05)和溶纖維丁酸弧菌(P0.01)數(shù)量顯著增加：回腸總菌(P0.01)、厚壁菌門(P0.05)、擬桿菌門(P0.01)、梭菌類群Ⅳ(P0.01)、浴纖維丁酸弧菌(P0.05)和梭菌類群Ⅰ(P0.01)數(shù)量顯著增加,而腸桿科科數(shù)量顯著降低(P0.01)。此外,乳酸桿菌屬(P0.05)、雙歧桿菌屬(P0.05)和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌(P0.05)數(shù)量?jī)H在高劑量組顯著增加,低劑量組則無變化；盲腸中,L.buchneri添加組僅有腸桿菌科數(shù)量均顯著降低(P0.01),而高劑量組中乳酸桿菌屬(P0.05)、溶纖維丁酸弧菌(P0.05)數(shù)量顯著增加,其它檢測(cè)菌屬無變化。此外,進(jìn)一步分析空腸、回腸和盲腸中E.coil,發(fā)現(xiàn)回腸和盲腸中布氏乳桿菌添加組E.coil數(shù)量顯著降低(P0.05),空腸也有降低但差異不顯著(P0.05)。由此可見,L.buchneri能夠提高腸道微生物豐富度,增加腸道中多種有益微生物數(shù)量,抑制部分有害菌增殖。qPCR檢測(cè)腸道TLRs基因表達(dá),L.buchneri添加組與對(duì)照組比較,各腸段中TLRs基因表達(dá)量均出現(xiàn)降低。L.buchneri添加組,空腸和盲腸TLR2和TLR4基因表達(dá)顯著降低(P0.01)；回腸TLR2和TLR4基因表達(dá)量,低劑量組均顯著低于對(duì)照組(P0.01),而高劑量組只有TLR4基因出現(xiàn)降低(P0.05),TLR2基因表達(dá)差異不顯著(P0.05),說明L.buchneri具有下調(diào)腸道TLR2和TLR4的能力。L.buchneri添加組外周血中TNF-α顯著升高(P0.01),且高劑量組高于低劑量組(P0.05)。IL-4在低劑量組和高劑量組均出現(xiàn)降低(P0.05),且高劑量組低于低劑量組(P0.05)。IL-1, IL-6和INF-y高劑量組與對(duì)照組比較顯著降低(P0.05),但低劑量組變化不顯著(P0.05)。IL-10和IL-12也有一定的變化但差異不顯著(P0.05)。結(jié)論：①獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸有益微生物數(shù)量減少,有害細(xì)菌數(shù)量增加：腸道菌群結(jié)構(gòu)在一定程度上有復(fù)雜化的趨勢(shì)：② L.buchneri能夠增加腸道菌群豐富度,顯著增加有益微生物數(shù)量,抑制部分有害細(xì)菌增殖；L.buchner能夠提高腸道菌群B/F比例,適量添加L.buchneri有助于提高獺兔飼料利用率；.buchner能夠下調(diào)腸道TLR2和TLR4基因表達(dá),有助于提高腸道組織對(duì)正常菌群的耐受,適量提高外周血TNF-α含量。
【關(guān)鍵詞】：獺兔 腹瀉 腸道菌群 布氏乳桿菌 TLRs
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S829.1
【目錄】：

• 符號(hào)說明4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 1 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 引言12
• 1.2 腸道菌群及其功能12-13
• 1.3 益生菌及其功能13-15
• 1.3.1 芽孢桿菌屬(Bacillus)14
• 1.3.2 乳酸桿菌屬(Lactobacillus)14
• 1.3.3 雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)14-15
• 1.4 乳酸菌功能15-17
• 1.4.1 營養(yǎng)功能15
• 1.4.2 預(yù)防和治療疾病15-16
• 1.4.3 提高動(dòng)物免疫力16-17
• 1.4.4 調(diào)整腸道微生態(tài)平衡17
• 1.5 TLRs相關(guān)研究17-20
• 1.5.1 TLRs的發(fā)現(xiàn)17-18
• 1.5.2 TLRs蛋白結(jié)構(gòu)18
• 1.5.3 TLR2和TLR4相應(yīng)配體18-19
• 1.5.4 TLR2和TLR4的分布19
• 1.5.5 乳酸桿菌與TLR2和TLR4相關(guān)研究19-20
• 1.6 研究目的及意義20-21
• 2 材料及方法21-27
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 主要試劑及儀器21
• 2.1.2 菌株準(zhǔn)備21-22
• 2.1.3 獺兔飼料制備22-23
• 2.2 方法23-26
• 2.2.1 動(dòng)物試驗(yàn)23
• 2.2.2 樣品采集23
• 2.2.3 DNA和RNA提取23-24
• 2.2.4 PCR-DGGE分析腸道菌群多樣性24
• 2.2.5 qPCR檢測(cè)腸道菌群數(shù)量24-25
• 2.2.6 qPCR分析TLR2和TLR4基因25-26
• 2.2.7 外周血血清中細(xì)胞因子檢測(cè)26
• 2.3 數(shù)據(jù)分析26-27
• 3 試驗(yàn)結(jié)果27-40
• 3.1 PCR-DGGE和qPCR分析健康與腹瀉獺兔盲腸菌群27-32
• 3.1.1 PCR-DGGE結(jié)果28
• 3.1.2 qPCR結(jié)果28-32
• 3.2 L.buchneri對(duì)獺兔腸道菌群及TLRs表達(dá)的影響32-40
• 3.2.1 PCR-DGGE檢測(cè)腸道菌群種類變化32-35
• 3.2.2 qPCR檢測(cè)腸道菌群數(shù)量變化35-38
• 3.2.3 TLRs基因在腸道中表達(dá)情況38
• 3.2.4 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)情況38-40
• 3.2.5 獺兔體重變化40
• 4 討論40-46
• 4.1 PCR-DGGE和qPCR分析健康與腹瀉獺兔盲腸菌群40-42
• 4.2 L.buchneri對(duì)獺兔腸道菌群及TLRs表達(dá)的影響42-46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文情況59

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2 王保紅;李e，

本文編號(hào)：846557