本文關(guān)鍵詞：靶向心肌細(xì)胞TLR4基因小干擾RNA載體構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： Toll樣受體 RNA干擾 RNA 小分子干擾 心肌細(xì)胞

【摘要】：目的:設(shè)計(jì)合成有效靶向Toll樣受體4(TLR4)基因小干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體,且挑選TLR4基因穩(wěn)定沉默心肌細(xì)胞。方法:依據(jù)RNA干擾(RNAi)序列設(shè)計(jì)原則,以TLR4基因?yàn)榘谢?合成3對(duì)小發(fā)夾RNA(shRNA)寡核苷酸鏈,經(jīng)退火、與線性化pSilence 2.1-U6neo質(zhì)粒連接、酶切、測(cè)序并鑒定。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞,新霉素(G418)加壓篩選并收集穩(wěn)定表達(dá)質(zhì)粒的心肌細(xì)胞,并觀察光鏡下心肌細(xì)胞形態(tài)。RT-PCR及Western Blot法檢測(cè)收集的心肌細(xì)胞TLR4mRNA和蛋白的表達(dá),確定siRNA對(duì)TLR4的抑制效率。結(jié)果:測(cè)序鑒定插入發(fā)夾樣序列正確,成功構(gòu)建了TLR4基因siRNA表達(dá)載體;并獲得了穩(wěn)定沉默TLR4的心肌細(xì)胞。未見細(xì)胞毒性形態(tài)學(xué)改變。多種方法均證實(shí)siRNA作用于TLR4基因后,心肌細(xì)胞TLR4 mRNA和蛋白表達(dá)均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最強(qiáng)。結(jié)論:成功構(gòu)建了靶向TLR4基因siRNA表達(dá)載體,并有效抑制心肌細(xì)胞TLR4表達(dá)。
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： Toll樣受體 RNA干擾 RNA 小分子干擾 心肌細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81471858)
【分類號(hào)】：R541
【正文快照】： Toll樣受體4(Toll like receptor-4,TLR4)是一種跨膜蛋白受體,TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在心肌缺血再灌注(I/R)損傷中發(fā)揮著重要作用[1]。RNA干擾(RNA interference,RNAi)是一種能特異性的抑制靶基因轉(zhuǎn)錄的基因沉默技術(shù)。本研究通過(guò)構(gòu)建靶向TLR4基因的小干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體,探討

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