發(fā)布時間：2017-09-13 12:06

  本文關(guān)鍵詞：靶向心肌細胞TLR4基因小干擾RNA載體構(gòu)建

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【摘要】：目的:設(shè)計合成有效靶向Toll樣受體4(TLR4)基因小干擾RNA(siRNA)表達載體,且挑選TLR4基因穩(wěn)定沉默心肌細胞。方法:依據(jù)RNA干擾(RNAi)序列設(shè)計原則,以TLR4基因為靶基因,合成3對小發(fā)夾RNA(shRNA)寡核苷酸鏈,經(jīng)退火、與線性化pSilence 2.1-U6neo質(zhì)粒連接、酶切、測序并鑒定。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染心肌細胞,新霉素(G418)加壓篩選并收集穩(wěn)定表達質(zhì)粒的心肌細胞,并觀察光鏡下心肌細胞形態(tài)。RT-PCR及Western Blot法檢測收集的心肌細胞TLR4mRNA和蛋白的表達,確定siRNA對TLR4的抑制效率。結(jié)果:測序鑒定插入發(fā)夾樣序列正確,成功構(gòu)建了TLR4基因siRNA表達載體;并獲得了穩(wěn)定沉默TLR4的心肌細胞。未見細胞毒性形態(tài)學(xué)改變。多種方法均證實siRNA作用于TLR4基因后,心肌細胞TLR4 mRNA和蛋白表達均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最強。結(jié)論:成功構(gòu)建了靶向TLR4基因siRNA表達載體,并有效抑制心肌細胞TLR4表達。
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： Toll樣受體 RNA干擾 RNA 小分子干擾 心肌細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81471858)
【分類號】：R541
【正文快照】： Toll樣受體4(Toll like receptor-4,TLR4)是一種跨膜蛋白受體,TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在心肌缺血再灌注(I/R)損傷中發(fā)揮著重要作用[1]。RNA干擾(RNA interference,RNAi)是一種能特異性的抑制靶基因轉(zhuǎn)錄的基因沉默技術(shù)。本研究通過構(gòu)建靶向TLR4基因的小干擾RNA(siRNA)表達載體,探討

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1 李娜;;心肌細胞可以再生[J];科技導(dǎo)報;2009年08期

2 蘇倩文;;心肌細胞可以再生[J];心血管病防治知識(科普版);2013年05期

3 萬朝敏,俞紅吉,吳泰相,高云欽,周密,鄧建軍,王正榮;免疫損傷對離體培養(yǎng)心肌細胞力學(xué)特性的影響[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2000年02期

4 賈士東,修瑞娟;心肌細胞功能的研究[J];中國微循環(huán);2000年03期

5 何作云,劉健;心肌細胞核鈣信號的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年02期

6 ;心肌細胞移植的現(xiàn)狀與發(fā)展前景[J];心腦血管病防治;2002年04期

7 陳緒軍;心肌細胞能夠再生:傳統(tǒng)概念的轉(zhuǎn)變[J];國外醫(yī)學(xué).心血管疾病分冊;2002年04期

8 王興祥,周利龍,馮義柏,程龍獻,丁家望;超氧陰離子自由基對心肌細胞的損傷作用[J];臨床心血管病雜志;2003年07期

9 王長明,劉俊峰;心肌細胞再生與心肌組織損傷修復(fù)[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年01期

10 遲路湘,吳澤志,龍勉;增齡對心肌細胞流變力學(xué)特性的影響[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2003年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張保國;趙萍;張文杰;;鉬對培養(yǎng)心肌細胞存活的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會首屆微量元素專題討論會論文摘要匯編[C];1985年

2 房亞東;黃躍生;黨永明;張家平;張東霞;宋華培;張瓊;;上調(diào)微管相關(guān)蛋白4對缺氧早期心肌細胞活力影響的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 何作云;劉健;王培勇;;心肌細胞核鈣信號的研究[A];21世紀(jì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2001年

4 滕苗;黃躍生;黨永明;房亞東;張瓊;;微管干預(yù)劑對缺氧心肌細胞糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

5 滕苗;黃躍生;鄭霽;黨永明;張瓊;;缺氧狀態(tài)下微管干預(yù)劑對心肌細胞能量生成的影響[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

6 劉廣林;朱天義;張吉文;;硒對心肌細胞的保護作用[A];中國營養(yǎng)學(xué)會首屆微量元素專題討論會論文摘要匯編[C];1985年

7 余細勇;李曉紅;;骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞的潛能與調(diào)控機制研究[A];第六屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文摘要集[C];2007年

8 滕苗;黃躍生;鄭霽;黨永明;張瓊;;缺氧狀態(tài)下微管干預(yù)劑對心肌細胞能量生成的影響[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

9 滕苗;黃躍生;黨永明;房亞東;張瓊;;微管干預(yù)劑對缺氧心肌細胞糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

10 張磊;高小清;姜紅;梁艷艷;劉明;鄒云增;;熱休克轉(zhuǎn)錄因子1對過氧化氫刺激條件下心肌細胞的保護作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 編譯 曉魚;人類心肌細胞可再生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

2 陳丹;移植的人體細胞可與豚鼠受體心肌同步跳動[N];科技日報;2012年

3 ;急性心梗治療獲重要突破 心肌細胞可以再生[N];中國保險報;2003年

4 記者 張曄;基因調(diào)控讓壞死的心肌細胞“復(fù)活”[N];科技日報;2011年

5 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院副教授 程蕾蕾;心臟的收縮功能[N];家庭醫(yī)生報;2010年

6 王月;綠茶可以保護心臟[N];人民日報;2007年

7 李月;讓心臟自我修復(fù)變“永動機”[N];大眾科技報;2009年

8 南京市鼓樓醫(yī)院心臟科 徐標(biāo) 康麗娜;干細胞修飾后治心衰希望更大[N];健康報;2012年

9 北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 周春燕;活體心臟帶給我們什么[N];健康報;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐磊;MMI-0100通過對心肌細胞及成纖維細胞中MK2的抑制作用降低心肌纖維化程度的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 牟永潮;基于納米材料再造心肌組織生物學(xué)評價與心梗治療研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

3 李娜;PDE5抑制劑Sildenafi1對心梗后心衰線粒體能量代謝保護及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 陳亮;miR-199a對大鼠心肌細胞自噬的調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 張翠翠;MG53調(diào)節(jié)心臟輔助亞基KChIP2表達的分子機制及在心電穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

6 張海彬;miR-711在心肌缺血再灌注損傷中的作用機制[D];吉林大學(xué);2016年

7 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細胞損傷對心肌細胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

8 榮榮;血小板源性生長因子-BB在缺氧心肌細胞中的作用及機制研究[D];山東大學(xué);2016年

9 李星;生長激素對心肌細胞代謝影響的研究[D];浙江大學(xué);2001年

10 王天星;多參數(shù)心肌細胞傳感器及其在藥物對心臟藥效和毒性分析中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱燕梅;銀杏葉提取物保護心肌細胞抗氧化損傷及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用機制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

2 劉佳;活性氧誘導(dǎo)心肌細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的激活及其分子機理[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 郝啟萌;NRG-1在缺血/再灌注冠脈微血管內(nèi)皮細胞—心肌細胞之間的作用及其機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 張婉婉;二甲基甲酰胺對心肌細胞炎性損傷的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

5 劉洋;大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞對心肌細胞電生理特征的影響[D];蘇州大學(xué);2013年

6 謝滿江;肥大心肌細胞向凋亡轉(zhuǎn)化機制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

7 曾平;晚期糖基化終產(chǎn)物對心肌細胞的影響及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

8 王興岡;鞘磷脂酶在柯薩奇病毒B3感染心肌細胞中的作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

9 陶天琪;肌纖形成調(diào)節(jié)因子-1減輕心肌細胞低氧/復(fù)氧損傷的分子機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

10 朱明霞;誘導(dǎo)重構(gòu)胚來源的小鼠胚胎干細胞分化為心肌細胞的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

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