本文關(guān)鍵詞：深海細(xì)菌太平洋火色桿菌中α-淀粉酶基因amy608的克隆表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)研究

  更多相關(guān)文章： 海洋生物學(xué) 太平洋火色桿菌 α-淀粉酶 中溫穩(wěn)定性 深海

【摘要】：從來自深海沉積物的太平洋火色桿菌(Flammeovirga pacifica)的基因組中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)全長(zhǎng)為1 875 bp的α-淀粉酶基因amy608.該基因在數(shù)據(jù)庫中找不到具有同源性的序列,而所編碼的Amy608蛋白與已注冊(cè)蛋白的氨基酸序列相似性最高僅為56%,但具有α-淀粉酶水解活性所必需的保守基序DXEXD.進(jìn)化樹分析表明其屬于糖苷水解酶13(GH13)家族第二亞家族.構(gòu)建了p ColdΙ-amy608表達(dá)載體,在大腸桿菌中進(jìn)行重組Amy608蛋白的異源表達(dá),并采用鎳離子親和層析柱對(duì)重組蛋白進(jìn)行了純化.酶學(xué)性質(zhì)分析表明,重組酶Amy608的最適作用溫度為40℃,在40℃保溫4 d后,仍保留70%以上的酶活,顯示出良好的中溫?zé)岱�(wěn)定性;最適p H值為7.0,p H值范圍在6~9時(shí)仍保留60%以上的酶活力,表明該酶具有較寬的p H值作用范圍.Ca2+、Na+、K+對(duì)α-淀粉酶Amy608有激活作用,尤其是Ca2+可使酶活顯著提高40%.薄層色譜分析結(jié)果顯示該酶水解可溶性淀粉的最終產(chǎn)物以葡萄糖為主,表明該酶是一個(gè)糖化型淀粉水解內(nèi)切酶.這些結(jié)果表明Amy608為GH13家族第二亞家族中一個(gè)新型的α-淀粉酶.
【作者單位】： 國(guó)家海洋局第三海洋研究所海洋生物遺傳資源省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;福建省海洋生物資源開發(fā)利用協(xié)同創(chuàng)新中心;廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;
【關(guān)鍵詞】： 海洋生物學(xué) 太平洋火色桿菌 α-淀粉酶 中溫穩(wěn)定性 深海
【基金】：中國(guó)大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會(huì)資助項(xiàng)目(DY125-15-T-06) 廈門南方海洋中心資助項(xiàng)目(13GZP003NF09) 國(guó)家微生物資源平臺(tái)資助項(xiàng)目(NIMR-2014-9)
【分類號(hào)】：Q78;Q936
【正文快照】： (1.國(guó)家海洋局第三海洋研究所、海洋生物遺傳資源省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地,福建廈門361005;2.福建省海洋生物資源開發(fā)利用協(xié)同創(chuàng)新中心,福建廈門361005;3.廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,福建廈門361100)α-淀粉酶(EC.3.2.1.1)屬于糖苷水解酶13家族,能夠作用于

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本文編號(hào)：840101