本文關(guān)鍵詞：貴州省豬源大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因檢測(cè)及轉(zhuǎn)移的研究

  更多相關(guān)文章： 大腸桿菌 四環(huán)素 耐藥性 耐藥基因 轉(zhuǎn)移 中藥 質(zhì)粒 消除

【摘要】：目前抗菌藥物的不合理使用導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥性問題越來越嚴(yán)重,這大大的增加了抗菌藥物對(duì)細(xì)菌性疾病防治的難度。為了解貴州省規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬源大腸桿菌對(duì)四環(huán)素類抗生素的耐藥水平和四環(huán)素耐藥基因的分子流行情況,探討細(xì)菌耐藥性獲得及傳播方式,建立大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因水平轉(zhuǎn)移模型,了解四環(huán)素耐藥基因在細(xì)菌間的轉(zhuǎn)移頻率和方式;同時(shí)探討解決大腸桿菌耐藥性問題的方法,采用中藥消除耐藥質(zhì)粒降低細(xì)菌耐藥性,為豬大腸桿菌病的防治和抗菌新藥的研究提供幫助。本研究參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn),采用微量肉湯稀釋法檢測(cè)大腸桿菌分離株對(duì)四環(huán)素類抗生素等12種藥物的耐藥情況,并通過PCR擴(kuò)增方法檢測(cè)其攜帶7種四環(huán)素耐藥基因情況。結(jié)果表明:160株大腸桿菌對(duì)四環(huán)素、金霉素、土霉素、米諾環(huán)素、地美霉素、強(qiáng)力霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、磺胺嘧啶和頭孢唑林的耐藥率分別為:94.36%、92.96%、100%、18.31%、70.42%、59.15%、66.29%、48.76%、29.82%、21.62%、91.67%、50.00%。大腸桿菌分離株最少對(duì)3種藥物耐藥,最多對(duì)11種藥物均耐藥,多重耐藥率達(dá)100%。四環(huán)素耐藥基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetM和tetO的檢出率分別為60.63%、74.38%、51.88%、11.88%、0、64.38%和0,四環(huán)素耐藥基因的檢出率與其對(duì)四環(huán)素的耐藥性呈正相關(guān)。四環(huán)素體外誘導(dǎo)鑒定耐藥基因?qū)Υ竽c桿菌耐藥水平的影響結(jié)果表明,在有藥物壓力下,含tetB基因的大腸桿菌菌株可以從敏感菌快速誘導(dǎo)成高度耐藥菌,tetB基因是影響大腸桿菌對(duì)四環(huán)素高度耐藥的重要因素之一。將含tetB基因的耐藥質(zhì)粒向大腸桿菌DH5α進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)成功獲得轉(zhuǎn)化子,說明大腸桿菌中四環(huán)素耐藥質(zhì)�？梢砸赞D(zhuǎn)化的方式向大腸桿菌DH5α進(jìn)行轉(zhuǎn)移tetB基因,且能在受體菌中穩(wěn)定編碼外排泵蛋白表達(dá)出四環(huán)素耐藥性。在tetB接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中,大腸桿菌EC1和EC2向沙門氏菌S1接合轉(zhuǎn)移頻率分別為1.68x10-3和2.24x10-3,而兩株大腸桿菌與金黃色葡萄球菌進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn)時(shí)未獲得接合子,表明大腸桿菌可能不能以接合的方式向金黃色葡萄球菌轉(zhuǎn)移四環(huán)素耐藥性。采用中藥消除耐藥質(zhì)粒從而降低質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)1/2MIC(最小抑菌濃度)的黃連、金銀花、艾葉、五倍子作用24h后對(duì)大腸桿菌耐藥性的消除率分別為5.34%、2.67%、10.01%、12.53%;作用48h后其消除率分別為7.27%、3.47%、10.93%、13.68%。研究耐藥性消除效果最好的五倍子大腸桿菌消除子耐藥質(zhì)粒的丟失情況和對(duì)抗菌藥物敏感性的恢復(fù)情況時(shí)發(fā)現(xiàn),消除子的質(zhì)粒丟失了1~3條條帶,對(duì)多種抗菌藥物的MIC值出現(xiàn)下降,對(duì)四環(huán)素、慶大霉素、卡那霉素和頭孢唑林的敏感性除個(gè)別菌恢復(fù)至中介外,均從耐藥恢復(fù)至敏感。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 四環(huán)素 耐藥性 耐藥基因 轉(zhuǎn)移 中藥 質(zhì)粒 消除
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-21
• 1. 大腸桿菌的研究現(xiàn)狀10-12
• 1.1 大腸桿菌的危害10-11
• 1.2 大腸桿菌的耐藥性研究11-12
• 2. 大腸桿菌對(duì)抗菌藥物的耐藥機(jī)制12-16
• 2.1 細(xì)菌對(duì)四環(huán)素類抗生素耐藥機(jī)制的研究13-14
• 2.2 四環(huán)素類抗生素的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)14
• 2.3 細(xì)菌對(duì)四環(huán)素類抗生素耐藥機(jī)制的研究14-16
• 3. 耐藥基因轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀16-18
• 4. 中藥消除細(xì)菌耐藥性的研究18-19
• 5. 本研究的目的與意義19-20
• 6. 主要研究內(nèi)容20-21
• 第一章 豬源大腸桿菌耐藥性和耐藥基因檢測(cè)21-37
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 1.1 藥物與試劑21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器21-22
• 1.3 引物22-23
• 1.4 實(shí)驗(yàn)菌株23
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法23-30
• 2.1 大腸桿菌的來源23-24
• 2.2 大腸桿菌的分離鑒定24
• 2.3 四環(huán)素類抗生素的藥敏實(shí)驗(yàn)24-27
• 2.4 四環(huán)素tet耐藥基因檢測(cè)27-30
• 3. 結(jié)果30-35
• 3.1 分離、鑒定結(jié)果30
• 3.2 耐藥性的檢測(cè)結(jié)果30-33
• 3.3 耐藥基因的檢測(cè)結(jié)果33-35
• 4.結(jié)果討論35-37
• 第二章 大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因的轉(zhuǎn)移37-53
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料37-39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑37-38
• 1.2 主要藥品38
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器38-39
• 1.4 試驗(yàn)菌株39
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 2.1 體外誘導(dǎo)鑒定耐藥基因?qū)Υ竽c桿菌耐藥水平的影響39-41
• 2.2 大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因轉(zhuǎn)移41-43
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-50
• 3.1 四環(huán)素藥物誘導(dǎo)前大腸桿菌的MIC值43-44
• 3.2 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)的結(jié)果44-47
• 3.3 接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-50
• 4. 結(jié)果討論50-53
• 第三章 中藥消除大腸桿菌耐藥性53-65
• 1 實(shí)驗(yàn)材料53-54
• 1.1 藥物與試劑53
• 1.2 儀器和試劑53-54
• 1.3 實(shí)驗(yàn)菌株54
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法54-56
• 2.1 中藥藥液的制備54
• 2.2 中藥提取液對(duì)致病性大腸桿菌MIC值的測(cè)定54-55
• 2.3 耐藥性的消除實(shí)驗(yàn)55
• 2.4 耐藥性消除子的篩選與鑒定55
• 2.5 耐藥性消除前后菌株質(zhì)粒的提取和電泳55
• 2.6 耐藥性消除前后的耐藥表型變化55-56
• 3. 結(jié)果與分析56-63
• 3.1 耐藥性的測(cè)定結(jié)果56
• 3.2 不同中藥提取液對(duì)大腸桿菌最小抑菌濃度MIC值的測(cè)定結(jié)果56-57
• 3.3 耐藥性消除實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-58
• 3.4 耐藥性消除前后菌株質(zhì)粒檢測(cè)結(jié)果58-59
• 3.5 耐藥性消除前后的耐藥表型變化59-63
• 4 結(jié)果討論63-65
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論65-66
• 致謝66-67
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 附錄74-75
• 縮略詞表75-77
• 實(shí)驗(yàn)圖77

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：824578