發(fā)布時間：2017-09-10 00:16

  本文關(guān)鍵詞：‘嘎啦’蘋果MYB22和MYB26基因啟動子的克隆與功能分析

  更多相關(guān)文章： ‘嘎啦’蘋果 MYB 啟動子 GUS 擬南芥

【摘要】：基因表達(dá)與基因的啟動子關(guān)系密切,探究基因啟動子的表達(dá)特征,一定程度上有助于基因功能的挖掘。實驗室已有的數(shù)據(jù)表明,對商業(yè)采收期‘嘎啦’蘋果果實MYB12和MYB16基因沉默可延緩‘嘎啦’蘋果果實采后成熟。為進(jìn)一步探究‘嘎啦’蘋果NIYB12和MYB16基因潛在的功能,以PCR方法克隆‘嘎啦’蘋果MYB12和MYB16基因的啟動子并在番茄和擬南芥體內(nèi)研究這兩個啟動子的表達(dá)特征。主要試驗結(jié)果如下：1.采用同源克隆方法從‘嘎啦’蘋果體內(nèi)克隆MYB基因啟動子ProMdMYB12和ProMdMYB16,長度分別為1290 bp和984 bp。同源比對顯示二者與參考序列的同源性分別達(dá)到99%和97%。PlantCARE和PLACE預(yù)測結(jié)果顯示,基礎(chǔ)順式作用元件、組織特異性表達(dá)元件、激素響應(yīng)元件、脅迫響應(yīng)元件、MYB/MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點、大量的光響應(yīng)元件以及其它類型的啟動子順式作用元件在ProMdYB12或ProMdYB16序列中均有發(fā)現(xiàn)。預(yù)測到的啟動子順式作用元件有助于對啟動子的功能進(jìn)行深入研究。2.番茄體內(nèi)瞬時表達(dá)ProMdYB12和ProMdMYB16的GUS組織化學(xué)染色結(jié)果表明這兩個啟動子在番茄的花藥和種子處具有較高的表達(dá)量,在番茄的果肉、葉片、花瓣乏花萼和花梗等部位沒有表達(dá)活性。GUS蛋白酶的熒光值定量結(jié)果與GUS組織化學(xué)染色結(jié)果一致,即轉(zhuǎn)基因番茄的花和種子的熒光定量值較高而葉片和果肉的熒光定量值較低。選擇ProMdYB16浸染并經(jīng)過GUS組織化學(xué)染色的番茄種子制作石蠟切片,研究啟動子在番茄種子處的表達(dá)特征。結(jié)果表明ProMdYB16能夠驅(qū)動GUS基因在番茄種子的種皮毛表達(dá)。3.試驗獲得12株P(guān)roMdYB16轉(zhuǎn)基因擬南芥。對ProMdYB16轉(zhuǎn)基因擬南芥各組織進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色。轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)初期GUS基因表達(dá)有兩種模式。種子萌發(fā)第一天,株系2(L2)GUS表達(dá)的部位是在種子胚,第二天是在子葉、子葉與胚軸連接處,第五天位于子葉基部與葉柄連接處以及根部但不包括根尖。株系6(L6),第一天沒有GUS基因表達(dá),第二天GUS活性出現(xiàn)在胚軸下部和胚根上部之間,第五天集中于根尖上部與胚軸靠下部分。幼苗發(fā)育到12天,各株系的GUS組織化學(xué)結(jié)果相似,即位于新生真葉的葉柄與頂端分生組織連接處、子葉主葉脈、根系節(jié)點和維管束組織等處。側(cè)根分化出根尖前啟動子在整個側(cè)根發(fā)育組織都具有較高活性,側(cè)根進(jìn)一步發(fā)育,但ProMdYB16始終不在根尖表達(dá),而是在新生側(cè)根的維管束有較高的表達(dá)。在營養(yǎng)器官,GUS組織化學(xué)染色主要是在托葉的主葉脈、莖葉基部和腋芽與莖的連接處。在生殖器官則集中在花粉粒。這些結(jié)果表明ProMdYB16具有種子胚、花粉和根的組織表達(dá)特異性。4.使用12天的轉(zhuǎn)ProMdYB16擬南芥幼苗研究啟動子對激素和非生物脅迫的響應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),200mM氯化鈉、20%聚乙二醇6000、100μM脫落酸、1mM水楊酸或100μ.M赤霉素處理的幼苗與對照之間GUS組織化學(xué)染色結(jié)果沒有明顯差異,經(jīng)42-C高溫處理12h.的幼苗新生真葉的葉柄與頂端分生組織連接處GUS表達(dá)活性增強(qiáng),而經(jīng)100p.M茉莉酸甲酯(MeJ)處理的幼苗各個部位的GUS組織化學(xué)染色消失。激素和非生物脅迫處理的結(jié)果初步表明ProMdYB16受高溫誘導(dǎo)表達(dá)而外源MeJ會抑制啟動子的表達(dá)活性。
【關(guān)鍵詞】：‘嘎啦’蘋果 MYB 啟動子 GUS 擬南芥
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2;S661.1
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 文獻(xiàn)綜述7-23
• 1.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子7-15
• 1.2 啟動子研究進(jìn)展15-22
• 1.3 課題研究背景與研究目的22-23
• 第二章 ‘嘎啦’蘋果MYB12和MYB16基因啟動子的克隆與植物表達(dá)載體的構(gòu)建23-41
• 2.1 材料23-25
• 2.2 試驗方法25-31
• 2.3 試驗結(jié)果31-41
• 第三章 ‘嘎啦’蘋果MYB12和MYB16基因啟動子功能分析41-55
• 3.1 材料41-43
• 3.2 試驗方法43-46
• 3.3 試驗結(jié)果46-55
• 第四章 討論與結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-78
• 致謝78-79
• 作者簡介79

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 況守龍;胡廷章;;啟動子的克隆和研究方法[J];重慶工學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年01期

2 李志新;曹雙河;張相岐;張懷剛;;偽鵝觀草高分子量麥谷蛋白基因啟動子的克隆[J];長江大學(xué)學(xué)報(自科版)農(nóng)學(xué)卷;2007年02期

3 高剛;魯艷芹;韓金祥;趙麗;;雙啟動子對增強(qiáng)型綠色熒光蛋白表達(dá)的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年10期

4 郝迪，

本文編號：823604