本文關(guān)鍵詞：SSUH2基因在牙齒發(fā)育中的分子機制研究一個掌跖角化牙周破壞綜合征家系CTSC基因突變鑒定及產(chǎn)前診斷

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【摘要】：背景：牙齒幾乎存在于所有的脊椎動物中,從胚胎早期預(yù)定成牙部位到形成完整的牙齒,是一個連續(xù)、長期并且極其復(fù)雜的生物學(xué)過程,包括上皮間充質(zhì)之間相互作用、細胞分化、組織礦化、成熟和牙齒萌出。牙齒是人體中最堅硬的器官,它由牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)和牙髓組成,其作為一個相對獨立的整體也較容易展開發(fā)育過程的系列研究。因此,牙齒的發(fā)育過程已成為來源于上皮組織的器官發(fā)育與進化研究的最佳模型,成為了近年來研究的熱點。盡管眾多科學(xué)家一直致力于牙齒發(fā)育調(diào)控的研究,但截止目前為止,仍有諸多牙齒發(fā)育的機制還沒被揭示,如遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良的致病基因還沒被發(fā)現(xiàn),決定DSPP基因礦化特異性表達的具體機制仍不明了等。明確牙齒發(fā)育的調(diào)控機制是目前研究的熱點也是難點,可以為牙齒的再生修復(fù)研究提供分子學(xué)基礎(chǔ),具有非常巨大的理論和臨床意義。牙齒的發(fā)育是諸多信號分子之間相互作用的結(jié)果,主要包括BMMP、FGF、Hh和Wnt這四大類信號分子。BMP(Bone morphogenetic protein)是骨形成發(fā)生蛋白,除BMP-1外,其余均屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)超家族。BMP家族中的許多成員都參與牙齒早期發(fā)育,調(diào)控牙齒的形態(tài)發(fā)生、細胞增殖和分化以及牙齒的萌發(fā)的過程,在對維持牙齒正常發(fā)育具有至關(guān)重要的作用,其中BMP2和BMP4在牙胚發(fā)育啟動階段發(fā)揮重要作用,而且對磨牙牙尖的形成起關(guān)鍵作用。FGF (Fibroblast growth factor)成纖維細胞生長因子是一類肽類分子,它們通過與細胞膜上特異性受體的結(jié)合來發(fā)揮作用,以此來調(diào)節(jié)細胞生長。FGF信號蛋白在牙齒發(fā)育早期就已經(jīng)有表達,能通過誘導(dǎo)Pax9、Paxl和Pix2等轉(zhuǎn)錄抑制的表達來決定牙齒的形成部位。Shh屬于Hedgehog (Hh)刺猬蛋白中一員,在牙板期的上皮就開始表達,并參與到牙齒的早期發(fā)育。Shh信號通路由Shh糖蛋白配體、跨膜受體Patched (Ptc)及Smoothened (Smo)、核轉(zhuǎn)錄因子Gli(Gli1、Gli2和Gli3)等組成。Shh信號通路在牙胚發(fā)育早期上皮-間充質(zhì)和上皮-上皮之間的信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,特別是調(diào)控上皮和間充質(zhì)細胞的增殖,誘導(dǎo)早期牙形態(tài)發(fā)生。Wnt是一類分泌型糖蛋白,其信號通路包括經(jīng)典的Wnt-β-catenin和非經(jīng)典Wnt信號通路(Wnt/JNK通路和Wnt/ca2+通路)。研究表明幾乎所有器官發(fā)生過程都必需有Wnt信號通路的調(diào)控,其在牙上皮和牙間充質(zhì)之間的相互誘導(dǎo)過程中起著重要的作用。在我們的前期研究工作中,發(fā)現(xiàn)了1個導(dǎo)致牙本質(zhì)發(fā)育不良I型新的致病基因SSUH2 (C3orf32,fls184),其位于3P26.1。有文獻報道稱SSUH2為伴侶分子,其表達與乳糜瀉有關(guān)。除此之外,針對SSUH2基因的研究仍是一片空白。本實驗室研究發(fā)現(xiàn),有一個牙本質(zhì)發(fā)育不良的大家系中所有患者都帶有SSUH2基因c.353 CA的一個雜合錯義突變,經(jīng)過分子學(xué)和動物模型研究,我們發(fā)現(xiàn)該基因的點突變會導(dǎo)致遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良的表型產(chǎn)生,但是SSUH2參與到牙齒發(fā)育的何種信號通路以及怎樣導(dǎo)致牙齒疾病表型產(chǎn)生等,仍未被揭示。所以,在本研究中我們將圍繞此SSUH2基因在牙齒尤其是牙本質(zhì)發(fā)育中的作用機制展開探討。目的：揭示SSHU2基因?qū)е卵辣举|(zhì)發(fā)育不良疾病的分子調(diào)控機制,篩選出與SSUH2互作的蛋白,闡明該基因參與的牙齒發(fā)育相關(guān)通路。進一步完善對SSUH2基因的研究,并為牙齒尤其是牙本質(zhì)和牙根的生理發(fā)育機制及相關(guān)的信號通路補充新的理論知識。材料與方法：1、研究材料：HEK293T細胞、牙齦成纖維細胞(HGF)、Ssuh2 knock out小鼠2、構(gòu)建SSUH2表達載體。本研究選用pcDNA-3.1(+)-flag以及pET-41a(+)(帶GST標(biāo)簽)來構(gòu)建SSUH2過表達載體。在SSUH2的CDS區(qū)的正向引物5’端連入BamHⅠ,反向引物5’端連入Hindm,并通過這兩個酶切位點將SSUH2連入pcDNA-3.1(+)-flag載體當(dāng)中。pET-41A(+)-SSUH2載體構(gòu)建引物的酶切位點加入順序剛好相反,HindⅢ酶切位點加在SSUH2的CDS區(qū)正向引物5’端,BamHⅠ酶切位點則加在反向引物5’端,以此來將SSUH2連入pET-41A(+)原核表達載體當(dāng)中。3、構(gòu)建人SSUH2基因的過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)HGF細胞株。將野生型和突變型的SSUH2基因分別構(gòu)建到C端融合myc標(biāo)簽的慢病毒載體上,包裝慢病毒,篩選出野生型和突變型SSUH2穩(wěn)轉(zhuǎn)HGF細胞株和空載對照HFG細胞株,并利用熒光定量PCR進行驗證。4、利用免疫共沉淀(CO-IP)篩選與SSUH2有相互作用的蛋白。在HEK293T細胞中過表達flag-SSUH2融合蛋白,并利用flag標(biāo)簽抗體進行CO-IP實驗,將IP產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳并用硝酸銀染色,質(zhì)譜技術(shù)鑒定差異表達的蛋白條帶,并用CO-IP以及免疫印跡進行驗證。5、運用RNA-seq技術(shù)在Ssuh2 knock out小鼠體內(nèi)篩選出受Ssuh2表達量影響的基因。選取胚胎期15天的同一窩基因型為Ssuh-/-與Ssuh2+/+的純合缺失及野生型小鼠,進行RNA-seq實驗。6、利用熒光定量PCR驗證RNA-seq結(jié)果。同樣是選取胚胎期為15天的同一窩Ssuh2 knock out小鼠及野生型小鼠,通過分離牙胚組織并進行總RNA提取,并利用逆轉(zhuǎn)錄PCR和熒光定量PCR對RNA-seq結(jié)果進行復(fù)核。7、取30天的野生型及Ssuh2缺失型小鼠的下頜,經(jīng)過固定,脫水,包埋等一系列步驟后進行石蠟切片,切片厚度為0.2微米。切片完成后,經(jīng)脫蠟、復(fù)水等步驟對切片進行HE染色處理,染色完成后進行干燥封片,于倒置顯微鏡進行拍照。8、選取四個月大的野生型及Ssuh2缺失型小鼠臼齒固定,并進行梯度脫水,接著將樣本浸泡在不同梯度的樹脂中,最后將樣本包埋與樹脂中進行打磨。打磨好的樣本先進行噴金,再通過掃描電子顯微鏡拍照。9、取8個月及9個月的野生型及Ssuh2缺失型小鼠進行固定,并采用顯微-CT進行小鼠骨骼掃描,隨后對圖片進行三維重構(gòu),并計算各基因型小鼠骨密度,比較不同基因型小鼠骨骼礦化及發(fā)育的情況。10、隨機選取野生型、插入移碼及缺失移碼Sshu2轉(zhuǎn)基因小鼠若干只,接著進行小鼠懸尾實驗,觀察其后肢伸展?fàn)顩r20s,并對各小鼠進行評分,考察其腿部力量。研究結(jié)果：1、成功構(gòu)建了野生型和突變型的SSUH2過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)HGF細胞株,熒光定量結(jié)果顯示,野生型及突變型SSHU2過表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的SSHU2 mRNA的量是對照組細胞的20倍以上(p=0.00010.05)。2、構(gòu)建了pcDNA3.1 (+)-flag-SSUH2 WT/MUT真核表達載體及pET-41 A(+)-SSUH2 WT/MUT原核表達載體,所有載體均經(jīng)過雙酶切后電泳及測序驗證,結(jié)果顯示載體構(gòu)建準(zhǔn)確。3, HEK293T細胞轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-flag空載及pcDNA3.1 (+)-flag-SSUH2,再用Flag抗體進行CO-IP實驗,然后取IP產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳,隨后進行硝酸銀染色,在過表達SSUH2蛋白的SDS-PAGE膠的上樣泳道的70 KDa處找出了一個差異表達蛋白條帶,進一步通過質(zhì)譜分析鑒定出GRP78這個基因。有報道稱該基因介導(dǎo)了牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白DPM1的入核。4、在野生型、純合Ssuh2缺失型及純合Ssuh2插入型小鼠的轉(zhuǎn)錄組中找到了29個差異表達基因。其中與牙齒、骨骼發(fā)育相關(guān)的基因有Col2a1、 CollOa1、Matn1,它們在Ssuh2 knock out小鼠中的表達均下調(diào)。并且熒光定量PCR結(jié)果顯示Ssuh2 knock out小鼠Col2al、CollOal、Matnl基因mRNA表達量下降,與RNA-seq結(jié)果相符。這29個差異表達基因還包含一個轉(zhuǎn)錄因子Fos,其在Ssuh2 knock out小鼠中的表達是增加的。5、野生型及Ssuh2基因缺失型小鼠下頜HE染色結(jié)果顯示,兩組小鼠的牙齒表型并沒有出現(xiàn)明顯的差異,例如前牙本質(zhì)區(qū)沒有發(fā)生變化。6、野生型及Ssuh2基因缺失型小鼠臼齒經(jīng)過電子掃描顯微鏡觀察,并沒有出現(xiàn)明顯區(qū)別,兩組的小鼠的牙釉質(zhì)超微結(jié)構(gòu)排列都比較緊密。7、選取三個時間段的野生型及Ssuh2基因缺失型小鼠進行骨骼顯微-CT掃描及骨密度分析,結(jié)果顯示突變型小鼠的骨骼發(fā)育沒有異常,其生長礦化與野生型亦沒有差別。8、對野生型、插入移碼及缺失移碼Sshu2轉(zhuǎn)基因小鼠懸尾實驗評分結(jié)果進行統(tǒng)計分析,結(jié)果顯示三組小鼠的評分無統(tǒng)計學(xué)差異,說明突變型小鼠的腿部收縮力并未受到影響。結(jié)論：RNA-seq及熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示SSHU2基因的表達會影響到COL2A1、COL10A1、MATN1、FOS這些基因的表達。Ssuh2 knock out、鼠的Clo2al、CollOal、Matnl基因表達下降,導(dǎo)致小鼠牙齒膠原蛋白的減少,使得牙本質(zhì)礦化異常,從而產(chǎn)生牙本質(zhì)發(fā)育不良表型。而且,Ssuh2 knock out小鼠的Fos基因表達增加。我們認(rèn)為這是因為Fos是Ssuh2的轉(zhuǎn)錄因子,而且它們的表達模式還存在負(fù)反饋調(diào)控。由于小鼠體內(nèi)Ssuh2表達降低,刺激Fos表達量增加,從而加強對Ssuh2基因的轉(zhuǎn)錄表達。CO-IP及質(zhì)譜實驗找出了SSHU2蛋白的相互作用蛋白GRP78(屬于Hsp70熱休克蛋白家族一員)。鑒于GRP78參與了牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白DMP1的內(nèi)吞作用,而且GRP78可以結(jié)合I型膠原蛋白COL1A1和DMP1,從而促進鈣、磷沉積,參與到牙齒的礦化過程。通過分析SSUH2的氨基酸序列發(fā)現(xiàn),SSUH2含有DnaJ的分子伴侶區(qū)域,DnaJ(Hsp40同源)能特異性地結(jié)合Dank(Hsp70蛋白),使其能夠參與蛋白轉(zhuǎn)運、折疊和錯誤蛋白的降解。綜上所述,SSUH2是通過DanJ區(qū)域與GRP78的Dank域結(jié)合,從而影響了膠原蛋白及DMP1的轉(zhuǎn)運,進而影響牙齒的礦化。野生型和突變型的SSUH2過表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)HGF細胞株的構(gòu)建成功,為后續(xù)的CO-IP實驗及RNA-seq結(jié)果驗證提供了樣本。經(jīng)過一系列小鼠表型實驗,包括下頜HE染色、臼齒的掃描電子顯微鏡分析、小鼠骨骼顯微-CT掃描及懸尾實驗,我們并沒有發(fā)現(xiàn)野生型和Ssuh2基因缺失型小鼠在牙齒、骨骼及腿部力量方面存在區(qū)別的情況。鑒于小鼠表型實驗與我們前期研究存在不一致的情況,我們分析討論認(rèn)為是由于物種差異導(dǎo)致的,人類與模式生物小鼠存在很大的種間差異,其發(fā)育調(diào)控機制差別較大。小鼠的不同發(fā)育階段,不同基因的表達存在一定的變化,某個基因?qū)ιL發(fā)育有深刻影響的特定階段難以把握。而且生命體是非常復(fù)雜的,某個別基因的表達量改變可能會通過其他調(diào)控機制對發(fā)育進行補救調(diào)節(jié),因此沒有致病表型產(chǎn)生。本研究通過一系列分子實驗找出GRP78、COL2A1、COL10A1、MATN1、FOS等與牙齒發(fā)育的相關(guān)基因,揭示了SSUH2基因與牙齒發(fā)育的重要基因的聯(lián)系,為后續(xù)進一步研究SSUH2基因參與牙齒發(fā)育信號通路的發(fā)掘提供了重要的信息。背景掌跖角化牙周破壞綜合征又名Papillon-Lefevre綜合征(Papillon-Lefevre syndrome,PLS),由法國人Papillon和Lefevre于1924年首次報告。掌跖角化牙周破壞綜合征(PLS)是一種罕見的常染色體隱性遺傳病(MIM 245000),在人群中的發(fā)病率為1～4/1000,000。該病的臨床特征為牙周組織嚴(yán)重破壞,牙齒過早脫落,掌跖、膝蓋、肘部等部位皮膚過度角化。研究顯示,有部分的PLS患者還伴有硬腦膜的鈣化。PLS的發(fā)病目前認(rèn)為與三個因素有關(guān),包括遺傳因素、口腔微生物及環(huán)境因素。到目前為止,微生物及環(huán)境因素的致病分子機制還未被研究清楚。但是,PLS發(fā)病的遺傳學(xué)基礎(chǔ)已被證實。PLS主要由組織蛋白酶C基因(CTSC)的突變引起,突變導(dǎo)致組織蛋白酶C功能喪失,引起免疫調(diào)節(jié)紊亂,繼而發(fā)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。CTSC基因位于常染色體11q14.1-q14.3,其編碼的組織蛋白酶C(cathepsinC)亦被稱作二肽肽酶(dipeptidyl peptidase I, DPP I),是一種溶酶體半胱氨酸蛋白酶,具有肽鏈內(nèi)切酶活性,能從蛋白質(zhì)底物的氨基酸末端去除二肽。研究表明,組織蛋白酶C能降解蛋白并活化一些酶原物質(zhì),參與體內(nèi)多種免疫和炎癥反應(yīng),例如吞噬細胞和T淋巴細胞的激活,用以清除病原微生物。PLS作為一種罕見的單基因遺傳病在我國并不多見,所以對其的研究報道比較少,而且多是進行病例報道,并沒有深入研究其發(fā)病的分子機制如CTSC基因突變篩查,明確致病基因位點和缺乏相關(guān)的產(chǎn)前診斷報道。所以,在我國,該基因的突變譜仍然沒有得到完善,而且由于大家對此疾病并不熟知并容易忽略口腔病變而延誤了早期對牙齒的防護治療,從而導(dǎo)致牙齒嚴(yán)重缺損。研究顯示近親結(jié)婚該病的發(fā)病率明顯增高,務(wù)必做好婚育知識普及和產(chǎn)前診斷來降低患兒出生率。目的：在本研究中,我們對來自廣東惠州的一個掌跖角化牙周破壞綜合征家系進行臨床表型分析和通過對相關(guān)致病基因CTSC的鑒定和分離,揭示其發(fā)病的分子機制。同時,隨著二胎政策的放開,為患者家庭生育二胎進行產(chǎn)前診斷和進一步的遺傳咨詢,從而在一定程度上預(yù)防患兒出生,達到提高人口素質(zhì)的目的。材料與方法：1.研究對象：來自廣東惠州的一個掌跖角化牙周破壞綜合征家系,先證者是一個四歲的小女孩,出生兩年后開始出現(xiàn)雙側(cè)掌跖部皮膚粗糙、脫屑,在南方醫(yī)院進行口腔牙齒的治療。2.研究方法：通過臨床表型、口腔檢查等對患者進行臨床診斷；通過PCR擴增CTSC基因7個外顯子,之后采用Sanger測序法對家系所有成員進行CTSC基因突變篩查；隨后運用PolyPhen-2和SIFT軟件對CTSC基因c.901GA突變進行有害性預(yù)測；同時,利用Swiss-Prot軟件對CTSC蛋白野生型及突變型進行了三級結(jié)構(gòu)預(yù)測；并采用熒光定量PCR技術(shù)對患者及其父母的CTSC基因mRNA進行定量分析,以及利用細胞轉(zhuǎn)染及免疫印跡等技術(shù)對野生型和突變型CTSC蛋白表達量進行研究。研究結(jié)果：1、系譜及表型分析結(jié)果：通過對病人口腔及皮膚等部位的臨床檢查,確診病人患有掌跖角化牙周破壞綜合征(PLS),該疾病為常染色體隱性遺傳病,致病基因為CTSC。2, CTSC基因突變位點確定：利用primer3.0及oligo7軟件設(shè)計了7對針對CTSC外顯子的引物,并對PLS家系成員基因組CTSC基因進行PCR擴增測序,測序結(jié)果通過NCBI-Blast進行比對分析。結(jié)果顯示,患者(Ⅲ1) CTSC基因第7外顯子存在c.901GA純合錯義突變,家系其他成員Ⅰ1,Ⅰ3,Ⅱ1及Ⅱ2均出現(xiàn)c.901GA的雜合突變。該堿基突變后,CTSC蛋白第301號氨基酸由甘氨酸變成絲氨酸(p.G301S)。3、mRNA水平分析：為探究CTSC基因c.901 GA純合突變與雜合突變在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄水平,本課題對家系中患者(Ⅲ1)與攜帶者Ⅱ1、Ⅱ2進行外周血CTSC基因mRNA定量。結(jié)果顯示,該家系PLS患者患者(Ⅲ1)的CTSC基因轉(zhuǎn)錄水平與攜帶者Ⅱ1、Ⅱ2的CTSC基因mRNA表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.480.05)。4、蛋白表達水平分析：為進一步研究突變后的CTSC蛋白的表達水平,將構(gòu)建好的p-EGFP-CTSC WT和p-EGFP-CTSC MUT載體分別轉(zhuǎn)染HEK293T細胞,24小時后收集蛋白進行免疫印跡檢測。結(jié)果顯示,CTSC野生型蛋白表達量與突變型蛋白表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.330.05)。5、生物信息學(xué)分析：CTSC基因c.901GA錯義突變在PolyPhen-2軟件上的預(yù)測是有害的,有害性評分是1(評分越接近1越有可能有害),且該位點高度保守。而SIFT軟件上的有害性預(yù)測評分為-5.599(低于-2.5即認(rèn)為該突變會影響表型),而且SIFT軟件預(yù)測結(jié)果顯示,無論該位點突變成何種的氨基酸,都是有害的。國外已有兩個掌跖角化綜合征家系CTSC基因c.901GA錯義突變的報道,說明預(yù)測結(jié)果可信度極大。并且,突變的氨基酸在Swiss-Prot軟件上給出的蛋白三級構(gòu)型模板中是位于α螺旋附近,野生型和突變型的蛋白存在兩個部分不一樣,有可能因此而影響到蛋白的功能。6、產(chǎn)前診斷：由于該家系已有一名患者(Ⅲ1),建議患者母親(Ⅱ 1)在二胎懷孕16-20周采集羊水進行產(chǎn)前診斷。該家系成員患者母親(Ⅱ1)在懷孕18周于惠州市第一婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心進行B超監(jiān)測下羊膜腔穿刺,取得羊水10ml。羊水DNA采用酚/氯仿法進行提取,將得到的DNA運用設(shè)計的CTSC基因第七號外顯子引物進行PCR擴增,送測序分析。結(jié)果顯示,胎兒的CTSC基因同樣存在純合c.901GA錯義突變,與該家系先證者基因型一致。結(jié)論：根據(jù)本課題組的研究,該惠州PLS家系患者(Ⅲ1) CTSC基因存在純合c.901GA錯義突變,該點突變有遺傳病史,家系成員Ⅰ1,Ⅰ3,Ⅱ1及Ⅱ2均攜帶c.901GA的雜合突變。通過熒光定量PCR實驗發(fā)現(xiàn),患者(Ⅲ1)及其父母(Ⅱ1、Ⅱ2)外周血CTSC基因轉(zhuǎn)錄的mRNA量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而且,免疫印跡實驗進一步證實野生型CTSC蛋白與突變型CTSC蛋白表達量差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義,說明該點突變不影響CTSC基因的轉(zhuǎn)錄翻譯。CTSC基因突變有害性預(yù)測顯示該點突變有害,SIFT和PloyPhen2預(yù)測結(jié)果非常相符,同時,PloyPhen2結(jié)果顯示該位點位于CTSC蛋白的高度保守區(qū)。Swiss-Port進行三維構(gòu)型后結(jié)果發(fā)現(xiàn),突變位點位于a螺旋附近,突變后造成突變型蛋白與野生型蛋白存在兩部分不一致的區(qū)域。故此,我們的結(jié)論是該CTSC基因c.901GA突變后編碼的組織蛋白酶C活性急劇下降是由于蛋白構(gòu)象發(fā)生了改變,從而影響了其正常的功能。罕見病的預(yù)防最關(guān)鍵是孕期進行產(chǎn)前診斷,本研究家系成員Ⅱ1在懷孕18周到醫(yī)院進行羊膜腔穿刺,通過對胎兒致病基因進行特異性擴增測序,檢測出胎兒同樣存在純合的c.901GA錯義突變。本課題的研究思路是先對單基因疾病進行臨床診斷,通過查閱國內(nèi)外對該疾病的研究,確定候選的致病基因,設(shè)計引物擴增致病基因,并進行測序分析進一步確定突變位點,再根據(jù)結(jié)果進行后續(xù)的產(chǎn)前診斷,這一模式有利于預(yù)防單基因罕見病患兒的出生,提高了我國出生人口的素質(zhì)。本課題首次在中國人群中報道了CTSC基因c.901GA突變導(dǎo)致掌跖角化牙周破壞綜合征,擴展了我國CTSC基因的突變譜,并且為該家系提供了定制的產(chǎn)前診斷服務(wù)。
【關(guān)鍵詞】：SSUH2 牙齒發(fā)育 牙本質(zhì)發(fā)育不良 分子機制 表型分析 掌跖角化牙周破壞綜合征 CTSC基因 突變分析 產(chǎn)前診斷
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781
【目錄】：

• 摘要3-13
• ABSTRACT13-25
• 第一部分 SSUH2基因在牙齒發(fā)育中的分子機制研究25-68
• 第1章 引言25-30
• 第2章 實驗材料30-34
• 第3章 實驗方法34-49
• 第4章 實驗結(jié)果49-60
• 第5章 分析與討論60-63
• 參考文獻63-68
• 第二部分 一個掌跖角化牙周破壞綜合征家系CTSC基因突變鑒定及產(chǎn)前診斷68-97
• 第1章 引言68-71
• 第2章 實驗材料71-75
• 第3章 實驗方法75-85
• 第4章 實驗結(jié)果85-92
• 第5章 分析與討論92-94
• 參考文獻94-97
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表論文97-98
• 致謝98-100
• 英文縮略詞表100-102

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9 陳遠嬌;丁一;劉敏川;;掌跖角化-牙周破壞綜合征1例[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

10 裴傳道;掌跖角化─—牙周破壞綜合征（附三例報告）[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;1995年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任永濤;徐峰;楊勤萍;;掌跖角化牙周病綜合征1例[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 劉忠義;黃曉欣;張碧霞;任渝江;張愛華;;芳維乙酯治療燃煤型砷中毒患者掌跖角化的臨床研究[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉翠嫻;SSUH2基因在牙齒發(fā)育中的分子機制研究一個掌跖角化牙周破壞綜合征家系CTSC基因突變鑒定及產(chǎn)前診斷[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：817470