本文關(guān)鍵詞：牛Mx1基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及沉默Mx1細(xì)胞的獲得

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【摘要】：采用RT-PCR技術(shù)從牛腎細(xì)胞中擴(kuò)增出Mx1基因,構(gòu)建牛Mx1基因過表達(dá)重組載體;針對(duì)牛Mx1mRNA序列設(shè)計(jì)shRNA引物對(duì),構(gòu)建針對(duì)牛Mx1的RNAi載體。將牛Mx1的過表達(dá)載體和RNAi載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,利用Western blot方法檢測(cè)牛Mx1蛋白的表達(dá)情況,篩選有效沉默牛Mx1的shRNA;將有效沉默Mx1的RNAi載體轉(zhuǎn)染牛胎兒氣管原代上皮細(xì)胞,經(jīng)流式細(xì)胞分選,Western blot檢測(cè),獲得沉默牛Mx1的穩(wěn)定細(xì)胞系。結(jié)果表明,成功構(gòu)建了牛Mx1過表達(dá)重組載體pcDNA3.1-Mx1和RNAi載體RNAi-Mx1A、RNAi-Mx1B、RNAi-Mx1C,篩選到RNAi-Mx1A沉默牛Mx1效果最好;經(jīng)流式細(xì)胞分選和Western blot檢測(cè),獲得有效沉默牛Mx1的牛胎兒氣管原代上皮細(xì)胞,為進(jìn)一步探討牛Mx1抗病毒作用及機(jī)制的研究奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 牛Mx基因 胎兒原代氣管上皮細(xì)胞 RNA干擾
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(奶牛)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系科學(xué)家崗位基金資助項(xiàng)目(Cars-37) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31272586;31302095) 山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新課題資助項(xiàng)目 獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題基金資助項(xiàng)目(SKLVBF201510) 山東省自然科學(xué)基金培養(yǎng)基金資助項(xiàng)目(ZR2014CP029) 山東省科技發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(2014GGC02058) 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目子課題資助項(xiàng)目(2014CXZ08-3);山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院重大成果培育項(xiàng)目資助項(xiàng)目(2015CGPY02)
【分類號(hào)】：S823
【正文快照】： RNAi-Mx1C.RNAi-Mx1Astrongly suppressed the transient expression of a Flag-tagged Mx1fu-sion protein in 293Tcells.The bovine fetal primary trachea epithelia cells silencing bovine Mx1were established by FACS and Western blot analysis,and it provides a goo，

本文編號(hào)：815775