發(fā)布時間：2017-09-05 05:29

  本文關鍵詞：NRP1調(diào)控的MLL5和HOXA基因在NSCLC輻射抗性中的作用研究

  更多相關文章： NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 輻射抗性

【摘要】：隨著經(jīng)濟與科技的不斷發(fā)展,環(huán)境污染、生態(tài)破壞等問題卻日趨嚴重,在各種化學因素、物理因素以及生物因素的影響下,惡性腫瘤的發(fā)病率逐年升高。其中,肺癌是所有惡性腫瘤中,發(fā)病率和死亡率增長速度最快、對健康威脅最大的惡性腫瘤之一。肺癌已經(jīng)成為造成我國城市人口死亡的首位惡性腫瘤。其中,非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占所有肺癌的80%,約3/4的患者在疾病發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期,五年生存率非常低。肺癌的治療主要包括手術(shù)、化療以及放療。大部分的NSCLC患者在診斷時已經(jīng)失去了手術(shù)機會,主要采取以放療為主的綜合治療或單純放療,但5年生存率僅為15%左右。腫瘤細胞對電離輻射的抗性,是其無法被放療治愈的原因之一。研究表明,神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)與腫瘤的惡性度相關,增強腫瘤的輻射抗性。我們通過全基因表達譜芯片發(fā)現(xiàn),輻射抗性肺癌細胞中NRP1調(diào)控下游基因的表達,從而影響其輻射敏感性,如HOXAs和MLLs基因等。本研究在體外構(gòu)建穩(wěn)定細胞系,采用基因表達譜芯片、q RT-PCR法、Westernblot法、MTT法和流式細胞術(shù)等實驗方法,探討NRP1與其下游的HOXAs、MLL5的調(diào)控關系以及對肺癌細胞的放射敏感性的影響,同時從整體水平探討NRP1與HOXA6、HOXA9和MLL5之間調(diào)控關系,并闡明其在NSCLC輻射抗性中的生物學意義。首先,通過microarray技術(shù)篩選出NRP1調(diào)控肺癌細胞輻射抗性的下游基因-HOXA6、HOXA9和MLL5,然后建立過表達和干擾NRP1的A549細胞模型,闡明NRP1對HOXA6、HOXA9和MLL5均具有正調(diào)控關系。其次,通過瞬時干擾HOXA6、HOXA9和MLL5表達的細胞模型,從細胞增殖、細胞凋亡、細胞周期等方面,檢測HOXAs和MLL5對A549細胞的輻射敏感性的影響。結(jié)果顯示,干擾HOXA9和MLL5后能夠抑制細胞增殖活性,且能抑制輻射誘導的細胞凋亡,可能與HOXA9干擾后能夠抑制輻射后S期細胞比例明顯減少的現(xiàn)象有關。最后,利用臨床肺癌患者的組織標本和荷瘤裸鼠模型,驗證NRP1與HOXA6、HOXA9和MLL5之間的確存在調(diào)控關系。本研究利用不同肺癌細胞系、臨床肺癌組織樣本和荷瘤動物模型,證實NRP1通過調(diào)控HOXAs和MLL5基因影響肺癌的輻射抗性,并揭示MLL5在這一通路上的作用。旨在為臨床肺癌的放射治療提供新的實驗依據(jù)和理論基礎。
【關鍵詞】：NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 輻射抗性
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 內(nèi)容提要4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-20
• 第1章 文獻綜述20-30
• 1.1 腫瘤與輻射抗性20
• 1.2 NRP120-22
• 1.2.1. NRP1的生物學特點20-21
• 1.2.2 NRP1與腫瘤21
• 1.2.3 NRP1與輻射抗性21-22
• 1.3 HOX基因22-25
• 1.3.1 HOX的生物學特點與功能22-23
• 1.3.2 HOXs基因與MLL基因23-24
• 1.3.3 HOXs基因與組蛋白修飾24-25
• 1.3.4 mi RNAs、Lnc RNAs與HOXs基因25
• 1.4 HOXS基因與腫瘤25-28
• 1.4.1 HOXs基因與乳腺癌26
• 1.4.2 HOXs基因與肺癌26-27
• 1.4.3 HOXs基因與前列腺癌27
• 1.4.4 HOXs基因與結(jié)直腸癌27-28
• 1.4.5 HOXs基因與其他腫瘤28
• 1.5 HOXS基因與電離輻射28
• 1.6 立題依據(jù)28-30
• 第2章 材料與方法30-48
• 2.1 主要器材與儀器30-31
• 2.1.1 實驗器材30
• 2.1.2 實驗儀器30-31
• 2.2 主要試劑31-33
• 2.3 試劑的配制33-36
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)相關試劑的配制33-34
• 2.3.2 細菌培養(yǎng)相關試劑的配制34
• 2.3.3 Western blot實驗相關試劑的配制34-35
• 2.3.4 堿裂解法質(zhì)粒提取相關試劑的配制35-36
• 2.3.5 感受態(tài)制備相關試劑的配制36
• 2.3.6 磷酸鈣轉(zhuǎn)染法相關試劑的配制36
• 2.4 細胞培養(yǎng)36-39
• 2.4.1 細胞株36
• 2.4.2 穩(wěn)定表達細胞模型的建立36-39
• 2.4.3 瞬時轉(zhuǎn)染細胞模型的建立39
• 2.4.4 輻射抗性細胞模型的建立39
• 2.5 臨床肺癌患者組織標本39
• 2.6 實驗動物39-40
• 2.7 照射條件40
• 2.7.1 細胞照射40
• 2.7.2 動物照射40
• 2.8 轉(zhuǎn)錄水平檢測40-42
• 2.9 蛋白表達水平檢測42-44
• 2.10 細胞放射敏感性及細胞表型指標的檢測44-45
• 2.10.1 MTT實驗44
• 2.10.2 細胞周期檢測44-45
• 2.10.3 細胞凋亡率檢測：Annexin V／PI雙染法45
• 2.11 免疫組化45-47
• 2.11.1 DAB二步法45-46
• 2.11.2 免疫熒光染色46-47
• 2.12 統(tǒng)計學分析47-48
• 第3章 實驗結(jié)果48-64
• 3.1 NRP1在肺癌細胞輻射抗性中的作用48-49
• 3.1.1 輻射抗性細胞模型A549-RR的建立及鑒定48
• 3.1.2 A549-RR細胞中NRP1的m RNA和蛋白水平變化48-49
• 3.1.3 A549-NRP1low模型的建立及鑒定49
• 3.2 篩選肺癌細胞輻射抗性中受NRP1調(diào)控的下游關鍵基因49-50
• 3.2.1 用基因芯片篩選NRP1調(diào)控輻射抗性的下游基因- MLL5、HOXA6、HOXA949-50
• 3.2.2 基因表達譜芯片結(jié)果中NRP1調(diào)控輻射抗性的下游基因的驗證50
• 3.3 探討NRP1與下游關鍵基因之間的調(diào)控關系50-52
• 3.3.1 NRP1對MLL5、HOXA6、HOXA9的調(diào)控規(guī)律50-51
• 3.3.2 MLL5、HOXA6和HOXA9基因干擾模型的建立51-52
• 3.3.3 MLL5、HOXA6、HOXA9對NRP1的影響52
• 3.4 電離輻射對NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表達的影響52-54
• 3.4.1 電離輻射對不同NRP1水平細胞的MLL5、HOXA6、HOXA9影響52-53
• 3.4.2 電離輻射后NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表達水平變化53-54
• 3.4.3 輻射抗性產(chǎn)生過程中NRP1、MLL5、HOXA6和HOXA基因表達量的變化54
• 3.5 NRP1及其調(diào)控的下游基因?qū)549細胞輻射效應的影響54-56
• 3.5.1 電離輻射對si RNA干擾模型細胞增殖活性的影響54-55
• 3.5.2 電離輻射對各種基因si RNA干擾模型細胞凋亡率的影響55-56
• 3.5.3 電離輻射對各種基因si RNA干擾模型細胞周期進程的影響56
• 3.6 整體水平驗證NRP1與MLL5、HOXA6、HOXA9在臨床NSCLC中的相關性56-61
• 3.6.1 NRP1及下游關鍵基因表達水平與NSCLC臨床病理分型的相關性56-59
• 3.6.2 NSCLC組織標本中NRP1與MLL5-HOXA6、HOXA9相關性59-61
• 3.6.3 NSCLC組織標本中血管生成相關因子的表達水平61
• 3.7 荷瘤裸鼠模型中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響61-64
• 3.7.1 裸鼠荷瘤模型的建立61-62
• 3.7.2 移植瘤中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響62-63
• 3.7.3 移植瘤中輻射對血管生成相關因子表達水平的影響63-64
• 第4章 討論64-69
• 4.1 篩選肺癌細胞輻射抗性中受NRP1調(diào)控的下游關鍵基因64-65
• 4.2 電離輻射對NRP1和下游關鍵基因的調(diào)控關系65-66
• 4.3 NRP1及其調(diào)控的下游基因?qū)549細胞輻射效應的影響66-67
• 4.4 整體水平驗證NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9與NSCLC的關系67-68
• 4.5 荷瘤裸鼠模型中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響68-69
• 第5章 結(jié)論69-70
• 參考文獻70-76
• 作者簡介76-78
• 致謝78

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本文編號：796117