本文關(guān)鍵詞：NRP1調(diào)控的MLL5和HOXA基因在NSCLC輻射抗性中的作用研究

  更多相關(guān)文章： NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 輻射抗性

【摘要】：隨著經(jīng)濟(jì)與科技的不斷發(fā)展,環(huán)境污染、生態(tài)破壞等問題卻日趨嚴(yán)重,在各種化學(xué)因素、物理因素以及生物因素的影響下,惡性腫瘤的發(fā)病率逐年升高。其中,肺癌是所有惡性腫瘤中,發(fā)病率和死亡率增長速度最快、對健康威脅最大的惡性腫瘤之一。肺癌已經(jīng)成為造成我國城市人口死亡的首位惡性腫瘤。其中,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占所有肺癌的80%,約3/4的患者在疾病發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期,五年生存率非常低。肺癌的治療主要包括手術(shù)、化療以及放療。大部分的NSCLC患者在診斷時已經(jīng)失去了手術(shù)機(jī)會,主要采取以放療為主的綜合治療或單純放療,但5年生存率僅為15%左右。腫瘤細(xì)胞對電離輻射的抗性,是其無法被放療治愈的原因之一。研究表明,神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)與腫瘤的惡性度相關(guān),增強(qiáng)腫瘤的輻射抗性。我們通過全基因表達(dá)譜芯片發(fā)現(xiàn),輻射抗性肺癌細(xì)胞中NRP1調(diào)控下游基因的表達(dá),從而影響其輻射敏感性,如HOXAs和MLLs基因等。本研究在體外構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系,采用基因表達(dá)譜芯片、q RT-PCR法、Westernblot法、MTT法和流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)方法,探討NRP1與其下游的HOXAs、MLL5的調(diào)控關(guān)系以及對肺癌細(xì)胞的放射敏感性的影響,同時從整體水平探討NRP1與HOXA6、HOXA9和MLL5之間調(diào)控關(guān)系,并闡明其在NSCLC輻射抗性中的生物學(xué)意義。首先,通過microarray技術(shù)篩選出NRP1調(diào)控肺癌細(xì)胞輻射抗性的下游基因-HOXA6、HOXA9和MLL5,然后建立過表達(dá)和干擾NRP1的A549細(xì)胞模型,闡明NRP1對HOXA6、HOXA9和MLL5均具有正調(diào)控關(guān)系。其次,通過瞬時干擾HOXA6、HOXA9和MLL5表達(dá)的細(xì)胞模型,從細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等方面,檢測HOXAs和MLL5對A549細(xì)胞的輻射敏感性的影響。結(jié)果顯示,干擾HOXA9和MLL5后能夠抑制細(xì)胞增殖活性,且能抑制輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,可能與HOXA9干擾后能夠抑制輻射后S期細(xì)胞比例明顯減少的現(xiàn)象有關(guān)。最后,利用臨床肺癌患者的組織標(biāo)本和荷瘤裸鼠模型,驗(yàn)證NRP1與HOXA6、HOXA9和MLL5之間的確存在調(diào)控關(guān)系。本研究利用不同肺癌細(xì)胞系、臨床肺癌組織樣本和荷瘤動物模型,證實(shí)NRP1通過調(diào)控HOXAs和MLL5基因影響肺癌的輻射抗性,并揭示MLL5在這一通路上的作用。旨在為臨床肺癌的放射治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 輻射抗性
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 內(nèi)容提要4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-20
• 第1章 文獻(xiàn)綜述20-30
• 1.1 腫瘤與輻射抗性20
• 1.2 NRP120-22
• 1.2.1. NRP1的生物學(xué)特點(diǎn)20-21
• 1.2.2 NRP1與腫瘤21
• 1.2.3 NRP1與輻射抗性21-22
• 1.3 HOX基因22-25
• 1.3.1 HOX的生物學(xué)特點(diǎn)與功能22-23
• 1.3.2 HOXs基因與MLL基因23-24
• 1.3.3 HOXs基因與組蛋白修飾24-25
• 1.3.4 mi RNAs、Lnc RNAs與HOXs基因25
• 1.4 HOXS基因與腫瘤25-28
• 1.4.1 HOXs基因與乳腺癌26
• 1.4.2 HOXs基因與肺癌26-27
• 1.4.3 HOXs基因與前列腺癌27
• 1.4.4 HOXs基因與結(jié)直腸癌27-28
• 1.4.5 HOXs基因與其他腫瘤28
• 1.5 HOXS基因與電離輻射28
• 1.6 立題依據(jù)28-30
• 第2章 材料與方法30-48
• 2.1 主要器材與儀器30-31
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)器材30
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器30-31
• 2.2 主要試劑31-33
• 2.3 試劑的配制33-36
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑的配制33-34
• 2.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)試劑的配制34
• 2.3.3 Western blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑的配制34-35
• 2.3.4 堿裂解法質(zhì)粒提取相關(guān)試劑的配制35-36
• 2.3.5 感受態(tài)制備相關(guān)試劑的配制36
• 2.3.6 磷酸鈣轉(zhuǎn)染法相關(guān)試劑的配制36
• 2.4 細(xì)胞培養(yǎng)36-39
• 2.4.1 細(xì)胞株36
• 2.4.2 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞模型的建立36-39
• 2.4.3 瞬時轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的建立39
• 2.4.4 輻射抗性細(xì)胞模型的建立39
• 2.5 臨床肺癌患者組織標(biāo)本39
• 2.6 實(shí)驗(yàn)動物39-40
• 2.7 照射條件40
• 2.7.1 細(xì)胞照射40
• 2.7.2 動物照射40
• 2.8 轉(zhuǎn)錄水平檢測40-42
• 2.9 蛋白表達(dá)水平檢測42-44
• 2.10 細(xì)胞放射敏感性及細(xì)胞表型指標(biāo)的檢測44-45
• 2.10.1 MTT實(shí)驗(yàn)44
• 2.10.2 細(xì)胞周期檢測44-45
• 2.10.3 細(xì)胞凋亡率檢測：Annexin V／PI雙染法45
• 2.11 免疫組化45-47
• 2.11.1 DAB二步法45-46
• 2.11.2 免疫熒光染色46-47
• 2.12 統(tǒng)計學(xué)分析47-48
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-64
• 3.1 NRP1在肺癌細(xì)胞輻射抗性中的作用48-49
• 3.1.1 輻射抗性細(xì)胞模型A549-RR的建立及鑒定48
• 3.1.2 A549-RR細(xì)胞中NRP1的m RNA和蛋白水平變化48-49
• 3.1.3 A549-NRP1low模型的建立及鑒定49
• 3.2 篩選肺癌細(xì)胞輻射抗性中受NRP1調(diào)控的下游關(guān)鍵基因49-50
• 3.2.1 用基因芯片篩選NRP1調(diào)控輻射抗性的下游基因- MLL5、HOXA6、HOXA949-50
• 3.2.2 基因表達(dá)譜芯片結(jié)果中NRP1調(diào)控輻射抗性的下游基因的驗(yàn)證50
• 3.3 探討NRP1與下游關(guān)鍵基因之間的調(diào)控關(guān)系50-52
• 3.3.1 NRP1對MLL5、HOXA6、HOXA9的調(diào)控規(guī)律50-51
• 3.3.2 MLL5、HOXA6和HOXA9基因干擾模型的建立51-52
• 3.3.3 MLL5、HOXA6、HOXA9對NRP1的影響52
• 3.4 電離輻射對NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表達(dá)的影響52-54
• 3.4.1 電離輻射對不同NRP1水平細(xì)胞的MLL5、HOXA6、HOXA9影響52-53
• 3.4.2 電離輻射后NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表達(dá)水平變化53-54
• 3.4.3 輻射抗性產(chǎn)生過程中NRP1、MLL5、HOXA6和HOXA基因表達(dá)量的變化54
• 3.5 NRP1及其調(diào)控的下游基因?qū)549細(xì)胞輻射效應(yīng)的影響54-56
• 3.5.1 電離輻射對si RNA干擾模型細(xì)胞增殖活性的影響54-55
• 3.5.2 電離輻射對各種基因si RNA干擾模型細(xì)胞凋亡率的影響55-56
• 3.5.3 電離輻射對各種基因si RNA干擾模型細(xì)胞周期進(jìn)程的影響56
• 3.6 整體水平驗(yàn)證NRP1與MLL5、HOXA6、HOXA9在臨床NSCLC中的相關(guān)性56-61
• 3.6.1 NRP1及下游關(guān)鍵基因表達(dá)水平與NSCLC臨床病理分型的相關(guān)性56-59
• 3.6.2 NSCLC組織標(biāo)本中NRP1與MLL5-HOXA6、HOXA9相關(guān)性59-61
• 3.6.3 NSCLC組織標(biāo)本中血管生成相關(guān)因子的表達(dá)水平61
• 3.7 荷瘤裸鼠模型中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響61-64
• 3.7.1 裸鼠荷瘤模型的建立61-62
• 3.7.2 移植瘤中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響62-63
• 3.7.3 移植瘤中輻射對血管生成相關(guān)因子表達(dá)水平的影響63-64
• 第4章 討論64-69
• 4.1 篩選肺癌細(xì)胞輻射抗性中受NRP1調(diào)控的下游關(guān)鍵基因64-65
• 4.2 電離輻射對NRP1和下游關(guān)鍵基因的調(diào)控關(guān)系65-66
• 4.3 NRP1及其調(diào)控的下游基因?qū)549細(xì)胞輻射效應(yīng)的影響66-67
• 4.4 整體水平驗(yàn)證NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9與NSCLC的關(guān)系67-68
• 4.5 荷瘤裸鼠模型中輻射對NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影響68-69
• 第5章 結(jié)論69-70
• 參考文獻(xiàn)70-76
• 作者簡介76-78
• 致謝78

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1 陳劍,劉芬菊;抗輻射球菌輻射抗性機(jī)制的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊);2003年05期

2 文潤玲,李國莉;口服枸杞子對人體淋巴細(xì)胞輻射抗性的研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2001年01期

3 王明鎖,杜澤吉,楊占山,汪濤;耐輻射菌的輻射抗性與其核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白相關(guān)性研究[J];中國輻射衛(wèi)生;2000年03期

4 文小倩,劉芬菊;腦膠質(zhì)瘤輻射抗性與逆轉(zhuǎn)問題研究進(jìn)展[J];輻射研究與輻射工藝學(xué)報;2005年01期

5 江國春,袁麗珍,魏康,郭學(xué)敏,張雪峰;HT1080R細(xì)胞的輻射抗性與細(xì)胞周期關(guān)系初步研究[J];中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志;2000年02期

6 張雪峰;細(xì)胞輻射抗性相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1999年04期

7 ;[J];;年期

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1 白明艷;李利;孫云峰;萬平;楊志偉;;Belnapia moabensis的輻射抗性以及γ-射線輻照后的蛋白質(zhì)組學(xué)分析[A];第四屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運(yùn)行服務(wù)研討會論文集[C];2012年

2 李德冠;吳紅英;王月英;路璐;孟愛民;張俊伶;王勇;王彥;常建輝;;IRM-2與親代小鼠骨髓輻射抗性比較研究[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會論文摘要集[C];2008年

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1 邵立虹;NRP1調(diào)控的MLL5和HOXA基因在NSCLC輻射抗性中的作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

2 陳劍;活性氧在抗輻射菌增殖和輻射抗性中的作用[D];蘇州大學(xué);2004年

3 薛景;SHG44細(xì)胞輻射抗性與Akt相關(guān)性的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

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本文編號：796117