發(fā)布時(shí)間：2017-09-05 00:31

  本文關(guān)鍵詞：紫花苜蓿無(wú)序蛋白MsZFP基因的克隆及功能研究

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【摘要】：固有無(wú)序蛋白是一類存在多種動(dòng)態(tài)互變結(jié)構(gòu),具有正常的生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。在分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中,固有無(wú)序蛋白通過(guò)與多種分子結(jié)合,引入復(fù)雜的多樣性互作,進(jìn)而在植物適應(yīng)逆境和脅迫應(yīng)答方面起到重要作用。MsZFP是一種轉(zhuǎn)錄因子具有手指狀結(jié)構(gòu)域,通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)其為固有無(wú)序蛋白,在細(xì)胞分化、基因表達(dá)調(diào)控、胚胎發(fā)育、增強(qiáng)植物脅迫的耐受性等方面具有重要作用。本研究從紫花苜蓿(Medicago sativa L)中克隆得到MsZFP基因,對(duì)煙草進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,為MsZFP基因功能及紫花苜�？鼓鏅C(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.MsZFP基因的克隆與序列分析通過(guò)RT-PCR方法克隆了MsZFP基因,該基因含有762 bp的開(kāi)放讀碼框,編碼253個(gè)氨基酸。具有2個(gè)保守的單C2H2型結(jié)構(gòu)域。對(duì)其開(kāi)放讀碼框氨基酸進(jìn)行無(wú)序性分析,發(fā)現(xiàn)其為固有無(wú)序蛋白。通過(guò)與其它物種中MsZFP近源基因的比對(duì)及進(jìn)化樹構(gòu)建發(fā)現(xiàn),紫花苜蓿MsZFP基因與蒺藜苜蓿、大豆、花生等物種中近源基因的親緣關(guān)系較近。2.pCBM-MsZFP植物表達(dá)載體的構(gòu)建構(gòu)建了含有MsZFP基因的植物表達(dá)載體pCBM-35S-MsZFP,含有草丁膦篩選標(biāo)記基因PPT和組成型啟動(dòng)子35S。3.MsZFP基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將MsZFP基因轉(zhuǎn)入煙草,獲得43株P(guān)PT抗性植株。對(duì)植株基因組DNA進(jìn)行PCR鑒定,獲得25株陽(yáng)性植株。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)陽(yáng)性植株基因表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因株系OX3、OX15、OX23中MsZFP的表達(dá)量比較高。4.對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草的抗逆性分析將野生型(WT)和轉(zhuǎn)基因煙草置于-4℃處理2 h,觀察到WT葉片明顯萎蔫,其相對(duì)電導(dǎo)率明顯高于轉(zhuǎn)基因煙草。在0℃低溫脅迫處理下,轉(zhuǎn)基因煙草的丙二醛含量明顯低于WT,脯氨酸、可溶性蛋白含量明顯高于WT。表明MsZFP基因可以提高植物的耐寒能力。將WT和轉(zhuǎn)基因煙草相同部位葉圓片浸泡于300 mM Na Cl溶液,7天后轉(zhuǎn)基因煙草仍保持綠色而WT明顯失綠,轉(zhuǎn)基因煙草的葉綠素含量明顯高于WT,表明MsZFP基因可提高植物對(duì)鹽脅迫的耐受性。
【關(guān)鍵詞】：固有無(wú)序蛋白 紫花苜蓿 MsZFP基因 抗逆 植物
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 第1章 緒論10-15
• 1.1 固有無(wú)序蛋白的研究進(jìn)展10-12
• 1.1.1 固有無(wú)序蛋白的分類及其特點(diǎn)10-11
• 1.1.2 固有無(wú)序蛋白的預(yù)測(cè)方法11
• 1.1.3 固有無(wú)序蛋白的功能11-12
• 1.2 ZFP蛋白的研究進(jìn)展12-14
• 1.3 本研究的目的和意義14-15
• 第2章 紫花苜蓿MsZFP基因的克隆15-30
• 2.1 引言15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器15-17
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料15
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品15-17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 2.3.1 紫花苜蓿葉片RNA的提取17-18
• 2.3.2 cDNA的合成18-19
• 2.3.3 PCR擴(kuò)增目的基因19
• 2.3.4 目的基因的回收19-20
• 2.3.5 大腸桿菌Top10感受態(tài)細(xì)胞制備20-21
• 2.3.6 目的基因克隆載體的構(gòu)建21
• 2.3.7 目的基因的測(cè)序和生物信息學(xué)分析21-22
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-29
• 2.4.1 紫花苜蓿MsZFP基因的克隆22-23
• 2.4.2 pMD18T- MsZFP克隆載體的構(gòu)建23-24
• 2.4.3 MsZFP序列的生物信息學(xué)分析24-29
• 2.5 本章小節(jié)29-30
• 第3章 MsZFP植物表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化30-44
• 3.1 引言30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器30-32
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料30
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品30-32
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法32-37
• 3.3.1 農(nóng)桿菌感受態(tài)EHA105的制備32-33
• 3.3.2 植物表達(dá)載體構(gòu)建33-35
• 3.3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草的遺傳轉(zhuǎn)化35-36
• 3.3.4 轉(zhuǎn)MsZFP基因煙草分子生物學(xué)檢測(cè)36-37
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-43
• 3.4.1 植物表達(dá)載體構(gòu)建37-41
• 3.4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因煙草的PCR檢測(cè)41-42
• 3.4.3 轉(zhuǎn)基因煙草的qRT-PCR檢測(cè)42-43
• 3.5 本章小結(jié)43-44
• 第4章 轉(zhuǎn)基因煙草抗逆性分析44-52
• 4.1 引言44
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器44
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料44
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法44-47
• 4.3.1 生理指標(biāo)檢測(cè)44-46
• 4.3.2 煙草抗逆性分析46-47
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-50
• 4.4.1 轉(zhuǎn)基因煙草低溫抗性分析47-48
• 4.4.2 煙草低溫抗性相關(guān)生理指標(biāo)檢測(cè)48-49
• 4.4.3 轉(zhuǎn)基因煙草鹽耐性分析49-50
• 4.5 本章小節(jié)50-52
• 第5章 討論52-55
• 5.1 植物無(wú)序蛋白與逆境脅迫52
• 5.2 C2H2型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子在抵抗脅迫方面的作用52-53
• 5.3 紫花苜�；騇sZFP具有抗逆功能53-54
• 5.4 下一步工作展望54-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文61-63
• 致謝63

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳月;紫花苜蓿無(wú)序蛋白MsZFP基因的克隆及功能研究[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：794758