本文關(guān)鍵詞：莖環(huán)法對(duì)轉(zhuǎn)ZmC1基因丹參毛狀根中microRNA表達(dá)分析

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【摘要】：目的:對(duì)轉(zhuǎn)Zm C1基因丹參毛狀根C1-3株系中8個(gè)microRNAs(miRNAs),即miR164b、miR166a、miR166b、miR171a、miR171b、miR172、miR394和miR397進(jìn)行表達(dá)定量分析。方法:以野生型丹參毛狀根為對(duì)照,采用莖環(huán)法(Stem-loop),針對(duì)每個(gè)miRNA設(shè)計(jì)3條引物,包括一條特異性反轉(zhuǎn)錄引物、一條上游引物和一條通用反向引物。每個(gè)miRNA單獨(dú)反轉(zhuǎn)錄,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q PCR)檢測轉(zhuǎn)基因丹參毛狀根C1-3中8個(gè)miRNA的表達(dá),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用ΔΔCt法進(jìn)行分析。結(jié)果:與野生型丹參毛狀根相比,在轉(zhuǎn)基因毛狀根C1-3中8個(gè)miRNA均表現(xiàn)為不同程度的上調(diào),其中miR394、miR397和miR164最為顯著,分別為對(duì)照的15.14倍、7.31倍和4.82倍。結(jié)論:莖環(huán)法可以成功應(yīng)用于檢測丹參中miRNA的表達(dá);C1-3中這幾個(gè)miRNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)可能與Zm C1異源表達(dá)引起的有效成分含量及形態(tài)發(fā)育表型變化相關(guān)。
【作者單位】： 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所;
【關(guān)鍵詞】： 莖環(huán)法 轉(zhuǎn)ZmC基因 丹參毛狀根 miRNA 表達(dá)分析 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【基金】：上海市教委科研創(chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目(14ZZ117)
【分類號(hào)】：S567.53
【正文快照】： microRNAs(miRNAs)是一類真核細(xì)胞中廣泛存在的內(nèi)源性非編碼小RNA[1]。成熟miRNA通過與靶基因互補(bǔ)配對(duì)引起靶基因的降解或者抑制其翻譯來調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)水平,miRNA是基因表達(dá)的重要調(diào)控分子[2],在植物的生長發(fā)育、激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、應(yīng)激反應(yīng)和次生代謝等方面都起著不可替代的調(diào)

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