本文關(guān)鍵詞：CYP4F2和β-actin基因?qū)崟r熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒和標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： CYPF基因 β-actin基因 實(shí)時熒光定量PCR 重組質(zhì)粒 標(biāo)準(zhǔn)品

【摘要】：目的制備用于CYP4F2和β-actin基因mRNA實(shí)時熒光定量PCR檢測的標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒與標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法通過PCR擴(kuò)增CYP4F2和β-actin進(jìn)行雙酶切鑒定和測序分析,確保重組質(zhì)粒完整正確;大量抽提重組質(zhì)粒,測定其拷貝濃度,10倍稀釋成梯度標(biāo)準(zhǔn)品,目的片斷純化后直接連接于p GEM-T easy載體,轉(zhuǎn)化E.coli DH5α宿主菌,獲得陽性克隆;通過PCR擴(kuò)增進(jìn)行熒光定量PCR檢測分析。結(jié)果 CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重組,獲得的重組質(zhì)粒保持了目的片段的特異性和序列完整性。梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示,循環(huán)閾值(Ct)與起始模板量的對數(shù)值之間有著良好的線性關(guān)系。結(jié)論成功構(gòu)建了CYP4F2和β-actin基因?qū)崟r熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒和標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【作者單位】： 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院藥劑科廣州市老年慢病患者合理用藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： CYPF基因 β-actin基因 實(shí)時熒光定量PCR 重組質(zhì)粒 標(biāo)準(zhǔn)品
【基金】：廣州市科技計劃項目(201509010012)
【分類號】：R440
【正文快照】： CYP4F2是人類細(xì)胞色素P450基因超家族成員之一,主要表達(dá)于肝臟和腎臟,是代謝花生四烯酸(AA)產(chǎn)生20-羥二十碳四烯酸(20-HETE)最主要的代謝酶[1-2]。腎臟中20-HETE具有多種血管活性,能調(diào)節(jié)腎臟的水鈉平衡,從而影響全身血壓[3-4]。β-actin是橫紋肌肌纖維中的一種主要蛋白質(zhì)成分,

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本文編號：781098