本文關(guān)鍵詞：TLR2、TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺組織中表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： 小尾寒羊 乳房炎 Toll樣受體2和4基因(TLR2 TLR4) qRT-PCR

【摘要】：Toll樣受體家族(Toll-like receptors,TLRs)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種非常重要的模式識別受體(PRRs),在先天免疫中感知分子模式(PAMPs),能夠識別病原微生物的入侵,激活并參與信號通路過程中的級聯(lián)反應(yīng),誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥因子和細(xì)胞因子,在宿主抵抗病原感染中發(fā)揮著極其重要的作用。為探討TLR2和TLR4在大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)引起的小尾寒羊(Ovis aries)乳房炎的乳腺組織中的表達(dá)情況,本實驗以大腸桿菌(O113型)和金黃色葡萄球菌分別人工感染小尾寒羊乳房,建立乳房炎病理模型,采用qRT-PCR檢測正常乳腺組織與分別感染大腸桿菌和金黃色葡萄球菌后48h、96h乳腺組織中TLR2和TLR4基因的相對表達(dá)量,用蛋白免疫印跡(Western-blot,WB)和免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)SP法研究了正常乳腺組織與分別感染大腸桿菌和金黃色葡萄球菌后乳腺組織中TLR2和TLR4蛋白的表達(dá)量和組織內(nèi)分布。結(jié)果顯示,正常乳腺組織與分別感染大腸桿菌和金黃色葡萄球菌后的乳腺組織中均有TLR2和TLR4的表達(dá),而感染細(xì)菌后48 h時TLR2和TLR4 mRNA相對表達(dá)量最高,96 h時TLR2和TLR4 mRNA相對表達(dá)量顯著低于48 h(P0.05),正常對照組TLR2和TLR4的相對表達(dá)量最低。其中,感染大腸桿菌后乳腺組織中TLR4 mRNA相對表達(dá)量極顯著高于TLR2(P0.01);感染金黃色葡萄球菌后乳腺組織中TLR2和TLR4 mRNA相對表達(dá)量差異不顯著。蛋白免疫印跡(WB)檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,感染兩種細(xì)菌后乳腺組織中TLR4蛋白相對表達(dá)量顯著增強(qiáng),且48 h時相對表達(dá)量顯著高于96 h(P0.05)。通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn),正常乳腺組織中TLR2和TLR4蛋白主要定位于乳腺腺泡上皮,與對照組相比,感染細(xì)菌后乳腺組織中陽性表達(dá)明顯增強(qiáng),且感染后48 h時表達(dá)最強(qiáng)烈。其中,感染大腸桿菌后乳腺組織中TLR4陽性表達(dá)強(qiáng)于TLR2的陽性表達(dá)(P0.05);感染金黃色葡萄球菌后乳腺組織中TLR2和TLR4蛋白主要表達(dá)在乳腺腺泡腔中脫落的乳腺上皮細(xì)胞和以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞上,且TLR2與TLR4的陽性表達(dá)差異不顯著。本研究結(jié)果表明,小尾寒羊感染大腸桿菌和金黃色葡萄球菌后乳腺組織中TLR2和TLR4的表達(dá)明顯上調(diào),這為進(jìn)一步研究TLR2和TLR4在綿羊乳房炎發(fā)病過程中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：小尾寒羊 乳房炎 Toll樣受體2和4基因(TLR2 TLR4) qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.26
【目錄】：

• 摘要2-4
• SUMMRY4-8
• 英文縮略表（Abbreviation）8-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-17
• 1 小尾寒羊乳房炎的研究進(jìn)展9-11
• 1.1 小尾寒羊種質(zhì)特性9
• 1.2 乳房炎的研究進(jìn)展9-11
• 2 Toll樣受體研究進(jìn)展11-15
• 2.1 TLRs的發(fā)現(xiàn)及分布11
• 2.2 TLRs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑11-12
• 2.3 TLRs的功能12-14
• 2.3.1 TLRs對相應(yīng)配體的識別12-14
• 2.3.2 TLRs在疾病抗感染中的研究14
• 2.4 牛乳房炎與TLR2、TLR4的相關(guān)研究進(jìn)展14-15
• 3 本研究的目的意義15-17
• 第二章 TLR2、TLR4基因在大腸桿菌引起的小尾寒羊乳房炎乳腺組織中的表達(dá)17-32
• 1 材料與方法17-24
• 1.1 主要試劑和儀器17-18
• 1.2 實驗動物及菌株18
• 1.3 小尾寒羊乳房炎模型的建立18
• 1.3.1 大腸桿菌的培養(yǎng)18
• 1.3.2 大腸桿菌感染小尾寒羊乳房18
• 1.4 引物的設(shè)計與合成18-19
• 1.5 總RNA的提取19
• 1.6 RT-PCR擴(kuò)增19-20
• 1.7 目標(biāo)基因的克隆和測序20
• 1.8 qRT-PCR檢測TLR2、TLR4基因的表達(dá)20
• 1.9 Western-blot檢測TLR4蛋白在乳腺組中的表達(dá)變化20-22
• 1.9.1 乳腺組織總蛋白的提取20-21
• 1.9.2 Western-blot免疫印跡21-22
• 1.10 免疫組織化學(xué)染色定位TLR2、TLR4蛋白的分布22-24
• 1.10.1 組織樣品的收集22
• 1.10.2 石蠟包埋和切片22-23
• 1.10.3 免疫組化23-24
• 1.11 數(shù)據(jù)分析24
• 2 結(jié)果24-29
• 2.1 總RNA的提取結(jié)果24
• 2.2 RT-PCR檢測結(jié)果24-25
• 2.3 目標(biāo)基因的克隆和測序25
• 2.4 TLR2、TLR4基因在感染大腸桿菌后的小尾寒羊乳腺組織中的表達(dá)25-27
• 2.5 小尾寒羊乳腺組織中TLR4蛋白表達(dá)的Western-blot檢測27
• 2.6 TLR2和TLR4蛋白在小尾寒羊乳腺組織中的分布檢測27-29
• 3 討論29-32
• 第三章 金黃色葡萄球菌對小尾寒羊乳腺組織TLR2、TLR4基因表達(dá)的影響32-42
• 1 材料與方法32-34
• 1.1 主要試劑和儀器32-33
• 1.2 實驗動物及菌株33
• 1.3 乳房炎模型的建立33
• 1.3.1 金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)33
• 1.3.2 金黃色葡萄球菌感染小尾寒羊乳房33
• 1.4 引物的設(shè)計與合成33
• 1.5 RT-PCR擴(kuò)增33-34
• 1.6 qRT-PCR檢測TLR2、TLR4基因表達(dá)的變化情況34
• 1.7 Western-blot檢測TLR4蛋白在乳腺組中的表達(dá)變化34
• 1.8 免疫組織化學(xué)染色定位TLR2、TLR4蛋白的分布34
• 2 結(jié)果34-39
• 2.1 RT-RCR檢測結(jié)果34-35
• 2.2 TLR2、TLR4基因在感染金黃色葡萄球菌后的小尾寒羊乳腺組織中的表達(dá)35-36
• 2.3 小尾寒羊乳腺組織中TLR4蛋白表達(dá)的Western-blot檢測36-37
• 2.4 TLR2和TLR4蛋白在小尾寒羊乳腺組織中的表達(dá)及分布檢測37-39
• 3 討論39-42
• 第四章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50-51
• 導(dǎo)師簡介51-52

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