本文關(guān)鍵詞：雞源大腸桿菌氟苯尼考耐藥基因floR檢測及傳播機制的初步研究

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【摘要】：隨著獸醫(yī)臨床菌株耐藥性逐年上升,多重耐藥及泛耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重。但是新獸藥的研發(fā)進展較緩慢,價格昂貴,對早期特別是不容易引起耐藥性的藥物的重新應(yīng)用可作為控制多重耐藥菌株導(dǎo)致的疾病的首要選擇。本論文初步研究了雞源大腸桿菌中質(zhì)粒介導(dǎo)氟苯尼考耐藥基因floR的流行狀況和傳播機制,為減少氟苯尼考耐藥菌株的出現(xiàn)和減緩耐藥的程度提供依據(jù),為解決獸醫(yī)臨床耐藥性傳播問題提供新思路。本研究對2013～2014年分離自常州地區(qū)的80株雞源大腸桿菌,首先,采用PCR方法檢測質(zhì)粒介導(dǎo)氟苯尼考耐藥基因floR,并以微量肉湯稀釋法測定80株大腸桿菌對阿莫西林、氟苯尼考、黏菌素、鏈霉素、恩諾沙星、多西環(huán)素、頭孢喹肟、安普霉素的體外最小抑菌濃度。其次,采用大腸桿菌系統(tǒng)進化分群對80株大腸桿菌的親緣關(guān)系進行判定。第三,對78株floR陽性菌株進行接合實驗,對得到的疑似接合子通過最小抑菌濃度和PCR兩種方法進行鑒定,并分析供體菌、受體菌、接合子三者的最小抑菌濃度以及接合子中floR耐藥基因的轉(zhuǎn)移情況。第四,取接合實驗成功的菌株進行脈沖場凝膠電泳(PFGE)并通過Southern雜交等方法研究floR的傳播方式以及floR耐藥基因的定位。研究結(jié)果如下：80株禽源大腸桿菌floR基因檢出率為97.50%(78/80)。floR基因在禽源大腸桿菌中具有相當(dāng)高的流行率。細(xì)菌對各藥物的耐藥率分別為：阿莫西林96.25%(77/80)、氟苯尼考90.00%(72/80)、黏菌素80.00%(64/80)、鏈霉素75.00%(60/80)、恩諾沙星72.50%(58/80)、多西環(huán)素56.25%(45/80)、安普霉素18.75%(15/80)。說明本研究中禽源大腸桿菌對氟苯尼考等大多藥物都有顯示嚴(yán)重的耐藥情況。通過大腸桿菌種族系統(tǒng)進化分析,80株禽源大腸桿菌中,非致病性菌株(A)為35.00%(28/80)、低致病性菌株(B1)35.00%(28/80)、高致病性菌株(B2)2.50%(2/80)和高致病性菌株(D)27.50%(22/80)。78株floR陽性菌株接合實驗結(jié)果表明,接合實驗的接合率為62.83%(49/78),floR接合子對氟苯尼考的MIC值比受體菌升高了16-32倍,而比供體菌MIC降低了2-8倍。同時發(fā)現(xiàn)接合子對阿莫西林、黏菌素、鏈霉素、恩諾沙星、多西環(huán)素、安普霉素的MIC值也發(fā)生了相應(yīng)的變化,由此得出氟苯尼考和其它常見藥物的耐藥性存在共傳遞效應(yīng)。且49株接合子中均含有floR耐藥基因。挑取的TM10、TM12和WJ13菌株檢測進行脈沖場凝膠電泳(S1-PFGE)并通過Southern雜交,顯示耐藥基因floR的質(zhì)粒為大質(zhì)粒,約為130-210kb左右。
【關(guān)鍵詞】：雞源大腸桿菌 耐藥性 質(zhì)粒介導(dǎo)的氟苯尼考耐藥基因 MIC 傳播機制
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 符號說明8-10
• 第一章 文獻綜述10-20
• 1 禽源大腸桿菌的耐藥現(xiàn)狀10-11
• 2 氟苯尼考藥物的研究進展11-13
• 2.1 氟苯尼考化學(xué)結(jié)構(gòu)和屬性11-12
• 2.2 氟苯尼考藥物的作用機制12
• 2.3 氟苯尼考藥物的應(yīng)用發(fā)展12-13
• 3 細(xì)菌對氟苯尼考的耐藥機制13-16
• 3.1 酶的滅活作用13
• 3.2 外排泵13-15
• 3.3 作用靶位的改變15-16
• 3.4 其他的耐藥機制16
• 4 氟苯尼考耐藥基因的傳播機制16-19
• 5 本研究的目的意義19-20
• 第二章 質(zhì)粒介導(dǎo)的氟苯尼考耐藥基因檢測及體外抑菌試驗20-35
• 1 材料20-21
• 1.1 儀器與設(shè)備20-21
• 1.2 主要試劑21
• 1.3 試驗菌株21
• 1.4 試驗藥物21
• 2 試驗方法21-27
• 2.1 細(xì)菌的分離和鑒定21-22
• 2.2 floR耐藥基因的檢測22-23
• 2.3 抗菌藥物對大腸桿菌MIC的測定23-25
• 2.4 大腸桿菌種族系統(tǒng)進化分析25-27
• 3 結(jié)果與分析27-33
• 3.1 floR基因檢測結(jié)果27-28
• 3.2 體外抑菌試驗結(jié)果28-31
• 3.3 大腸桿菌種族系統(tǒng)進化分析結(jié)果31
• 3.4 不同系統(tǒng)進化分群大腸桿菌菌株耐藥結(jié)果31-33
• 4 討論33-34
• 5 小結(jié)34-35
• 第三章 大腸桿菌質(zhì)粒介導(dǎo)氟苯尼考耐藥基因floR傳播機制35-45
• 1 材料35-36
• 1.1 儀器與設(shè)備35
• 1.2 主要試劑35-36
• 1.3 試驗菌株36
• 2 試驗方法36-40
• 2.1 接合實驗36
• 2.2. 疑似接合子的鑒定36
• 2.3 floR陽性菌株P(guān)FGE分型36-39
• 2.4 floR陽性菌株的定位39-40
• 3 結(jié)果與分析40-43
• 3.1 陽性菌的接合試驗結(jié)果40
• 3.2 floR陽性接合子的耐藥基因擴增及藥物敏感性結(jié)果40-41
• 3.3 接合子及原菌株的MIC比較41-43
• 3.4 floR陽性菌定位結(jié)果43
• 4 討論43-44
• 5 小結(jié)44-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻46-53
• 致謝53-54
• 在讀期間發(fā)表的文章54-55

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本文編號：779481