本文關(guān)鍵詞：Clk1基因表達(dá)下調(diào)通過糖酵解逆轉(zhuǎn)增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對化療藥物的耐受性

  更多相關(guān)文章： Clk1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞 藥物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信號(hào)通路

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤,具有惡性度高、預(yù)后性差的特點(diǎn)。產(chǎn)生藥物耐受性是膠質(zhì)瘤患者臨床治療的主要障礙,而線粒體基因突變在許多惡性腫瘤的化療藥物耐受中發(fā)揮重要作用。線粒體基因Clk1編碼輔酶Q(Co Q)生物合成關(guān)鍵酶,在本實(shí)驗(yàn)中,我們探討了Clk1基因在膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生藥物耐受過程中的作用。研究發(fā)現(xiàn),Clk1基因高表達(dá)的GL261細(xì)胞對抗腫瘤藥物具有較高的敏感性,而在BCNU耐受的膠質(zhì)瘤細(xì)胞如U251、U87MG、T98G中Clk1基因的表達(dá)量較少。沉默Clk1基因不影響GL261細(xì)胞的增殖活力,卻能顯著減低BCNU或DDP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。此外,沉默Clk1基因的GL261細(xì)胞中細(xì)胞耐藥性相關(guān)基因如MDR1、MGMT、GSTP1的表達(dá)量無明顯變化。進(jìn)一步的機(jī)制研究結(jié)果表明,Clk1基因沉默的GL261細(xì)胞有氧糖酵解活性顯著增強(qiáng),具體表現(xiàn)在葡萄糖消耗量增加、乳酸生成量增加、糖酵解相關(guān)酶表達(dá)量增加。采用抑制劑或si RNA干擾抑制糖酵解通路可以增強(qiáng)sh Clk1-GL261細(xì)胞對化療藥物的敏感性。另外,GL261細(xì)胞中沉默Clk1基因誘導(dǎo)AMPK/m TOR信號(hào)通路介導(dǎo)的HIF-1α表達(dá)量升高,激活A(yù)MPK(metaformine)或抑制m TOR(rapamycine)可以抑制HIF-1α表達(dá)。在GL261細(xì)胞或人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)Clk1基因可以增強(qiáng)細(xì)胞對BCNU的敏感性。上述結(jié)果證實(shí)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞中線粒體Clk1基因通過AMPK/m TOR/HIF-1α信號(hào)通路介導(dǎo)的糖酵解途徑增強(qiáng)細(xì)胞對化療藥物的耐受性。
【關(guān)鍵詞】：Clk1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞 藥物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-11
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法11-21
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞11
• 2 實(shí)驗(yàn)儀器11-12
• 3 實(shí)驗(yàn)試劑12-14
• 4 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 4.1 溶液配制14-15
• 4.2 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞系構(gòu)建15-16
• 4.3 總RNA提取和RT-PCR16-18
• 4.4 Western Blotting免疫印跡18-19
• 4.5 MTT檢測19
• 4.6 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)19
• 4.7 體內(nèi)腫瘤模型建立19
• 4.8 細(xì)胞代謝檢測19-20
• 5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-31
• 1 Clk1表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的化藥敏感性相關(guān)21-22
• 2 沉默Clk1基因降低GL261細(xì)胞對抗腫瘤藥物的敏感性22-24
• 3 Clk基因敲除導(dǎo)致細(xì)胞糖酵解水平升高24-27
• 4 HIF-1α介導(dǎo)Clk1缺失誘導(dǎo)的有氧糖酵解和藥物耐受27-28
• 5 mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)HIF-1α表達(dá)28-29
• 6 Clk1過表達(dá)增強(qiáng)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BCNU的敏感性29-30
• 7 Clk1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤藥物耐受性中的作用30-31
• 討論31-34
• 小結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-43
• 綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文55-56
• 附錄：縮略詞表56-58
• 致謝58-59

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