本文關鍵詞：Clk1基因表達下調(diào)通過糖酵解逆轉(zhuǎn)增強膠質(zhì)瘤細胞對化療藥物的耐受性

  更多相關文章： Clk1 膠質(zhì)瘤細胞 藥物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信號通路

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤,具有惡性度高、預后性差的特點。產(chǎn)生藥物耐受性是膠質(zhì)瘤患者臨床治療的主要障礙,而線粒體基因突變在許多惡性腫瘤的化療藥物耐受中發(fā)揮重要作用。線粒體基因Clk1編碼輔酶Q(Co Q)生物合成關鍵酶,在本實驗中,我們探討了Clk1基因在膠質(zhì)瘤細胞產(chǎn)生藥物耐受過程中的作用。研究發(fā)現(xiàn),Clk1基因高表達的GL261細胞對抗腫瘤藥物具有較高的敏感性,而在BCNU耐受的膠質(zhì)瘤細胞如U251、U87MG、T98G中Clk1基因的表達量較少。沉默Clk1基因不影響GL261細胞的增殖活力,卻能顯著減低BCNU或DDP誘導的細胞凋亡。此外,沉默Clk1基因的GL261細胞中細胞耐藥性相關基因如MDR1、MGMT、GSTP1的表達量無明顯變化。進一步的機制研究結(jié)果表明,Clk1基因沉默的GL261細胞有氧糖酵解活性顯著增強,具體表現(xiàn)在葡萄糖消耗量增加、乳酸生成量增加、糖酵解相關酶表達量增加。采用抑制劑或si RNA干擾抑制糖酵解通路可以增強sh Clk1-GL261細胞對化療藥物的敏感性。另外,GL261細胞中沉默Clk1基因誘導AMPK/m TOR信號通路介導的HIF-1α表達量升高,激活AMPK(metaformine)或抑制m TOR(rapamycine)可以抑制HIF-1α表達。在GL261細胞或人源膠質(zhì)瘤細胞中過表達Clk1基因可以增強細胞對BCNU的敏感性。上述結(jié)果證實了膠質(zhì)瘤細胞中線粒體Clk1基因通過AMPK/m TOR/HIF-1α信號通路介導的糖酵解途徑增強細胞對化療藥物的耐受性。
【關鍵詞】：Clk1 膠質(zhì)瘤細胞 藥物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信號通路
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-11
• 實驗材料和方法11-21
• 1 實驗動物和細胞11
• 2 實驗儀器11-12
• 3 實驗試劑12-14
• 4 實驗方法14-20
• 4.1 溶液配制14-15
• 4.2 細胞培養(yǎng)與細胞系構(gòu)建15-16
• 4.3 總RNA提取和RT-PCR16-18
• 4.4 Western Blotting免疫印跡18-19
• 4.5 MTT檢測19
• 4.6 細胞增殖實驗19
• 4.7 體內(nèi)腫瘤模型建立19
• 4.8 細胞代謝檢測19-20
• 5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學方法20-21
• 實驗結(jié)果21-31
• 1 Clk1表達水平與膠質(zhì)瘤細胞的化藥敏感性相關21-22
• 2 沉默Clk1基因降低GL261細胞對抗腫瘤藥物的敏感性22-24
• 3 Clk基因敲除導致細胞糖酵解水平升高24-27
• 4 HIF-1α介導Clk1缺失誘導的有氧糖酵解和藥物耐受27-28
• 5 mTOR信號通路介導HIF-1α表達28-29
• 6 Clk1過表達增強了膠質(zhì)瘤細胞對BCNU的敏感性29-30
• 7 Clk1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤藥物耐受性中的作用30-31
• 討論31-34
• 小結(jié)34-35
• 參考文獻35-43
• 綜述43-55
• 參考文獻51-55
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文55-56
• 附錄：縮略詞表56-58
• 致謝58-59

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