發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 12:14

  本文關(guān)鍵詞：羊種布魯氏菌新疆流行株015株sodc基因缺失株的構(gòu)建與初步評價(jià)

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【摘要】：為了構(gòu)建布魯氏菌015 sodc基因缺失株,本研究采用PCR方法以熱滅活的羊種布魯氏菌新疆流行株015為模板,分別擴(kuò)增sodc基因的上下游同源臂序列;以枯草芽孢桿菌為模板,擴(kuò)增Sac B基因,將擴(kuò)增序列分別連至克隆載體p MD19-T simple上并測序,然后在雙酶切后將上下游同源臂序列連接至自殺載體p GEM-7Zf+上,分別得到了p GEM-7zf-Δsodc,再將Sac B基因單酶切后連接至上述載體上,構(gòu)建成同源重組自殺質(zhì)粒pss。經(jīng)8%蔗糖平板篩選鑒定Sac B基因的活性。將構(gòu)建好的自殺質(zhì)粒分別電轉(zhuǎn)化至布魯氏菌015感受態(tài)細(xì)胞中,通過氨芐抗性篩選和8%蔗糖敏感篩選后獲得了015Δsodc基因缺失株。對獲得的基因缺失株進(jìn)行PCR鑒定和遺傳穩(wěn)定性檢測。通過檢測侵染小鼠巨噬細(xì)胞cfu、缺失株免疫小鼠后體內(nèi)Ig G,IFN-γ的水平,及脾臟cfu,對其毒力進(jìn)行了初步評價(jià)。結(jié)果表明,該缺失株20代內(nèi)未發(fā)生回復(fù)性突變,成功構(gòu)建了具有非抗性基因標(biāo)記的缺失株,并且015Δsodc細(xì)胞cfu、脾臟cfu,及IFN-γ的水平都顯著低與親本株015,說明毒力與親本株相比有一定程度的下降。本研究可為今后布魯氏菌致病機(jī)理及新疫苗的研究提供實(shí)驗(yàn)材料。
【作者單位】： 石河子大學(xué)動物科技學(xué)院/新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;銅仁學(xué)院生物與農(nóng)林工程學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 布魯氏菌 sodc基因 缺失株
【基金】：國際科技合作項(xiàng)目(2013DFA32380) 國家大學(xué)生SRP項(xiàng)目(201510759063)
【分類號】：S852.61
【正文快照】： 布魯氏菌病是由布魯氏菌屬(Brucella)成員引起的一種慢性人畜共患傳染病[1-2]。人感染后表現(xiàn)為持續(xù)發(fā)熱、多汗及肝脾腫大,家畜感染后可造成流產(chǎn)、空懷等[3]。目前,此病已使全世界遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來,隨著畜牧業(yè)的發(fā)展,我國和世界部分地區(qū)布魯氏菌病的人畜疫情均出現(xiàn)，

本文編號：778476