本文關(guān)鍵詞：西瓜抗枯萎病相關(guān)基因ClMYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆及表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 西瓜 枯萎病 CIMYB轉(zhuǎn)錄因子 基因克隆 表達(dá)分析

【摘要】：【目的】克隆西瓜抗枯萎病相關(guān)基因CIMYB轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)行生物信息學(xué)及表達(dá)模式分析,為進(jìn)一步解析CIMYB在西瓜抗枯萎病機(jī)制中的作用提供理論依據(jù)�！痉椒ā扛鶕�(jù)西瓜與枯萎病菌不親和互作的抑制差減文庫和Microarray數(shù)據(jù)分析,獲得與西瓜抗枯萎病相關(guān)的基因CIMYB,采用RT-PCR技術(shù)分離克隆CIMYB c DNA全長序列;應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析該基因的保守結(jié)構(gòu)域及序列特征;使用MEGA5.0對CIMYB蛋白序列及其同源序列進(jìn)行多序列比對,并構(gòu)建同源物種間系統(tǒng)進(jìn)化樹;采用GFP標(biāo)記的方法進(jìn)行亞細(xì)胞定位,分析編碼蛋白表達(dá)位置;將該基因片段通過Nde I和Xba I雙酶切連接至原核表達(dá)載體p Czn1,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Arctic Express,經(jīng)終濃度為0.5 mmol·L~(-1) IPTG誘導(dǎo)4 h,用SDS-PAGE分析融合蛋白的表達(dá);利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測目的基因在西瓜與枯萎病菌互作中及在茉莉酸(jasmonate,JA)誘導(dǎo)下的表達(dá)情況。【結(jié)果】利用RT-PCR方法從西瓜野生材料PI296341-FR根系組織中克隆該基因片段(Gen Bank:KT751229),序列比對及生物信息學(xué)分析表明,其基因編碼的氨基酸序列具有MYB轉(zhuǎn)錄因子R2R3型的典型特征,其N端具有R2、R3兩個(gè)MYB結(jié)構(gòu)域,C端高度變異。多序列比對及進(jìn)化樹分析表明,該基因編碼的蛋白與甜瓜MYB(Gen Bank:XM_008440304)和黃瓜MYB(Gen Bank:XM_011652633)同源性最高,其編碼的氨基酸一致性達(dá)到86%,這與它們同屬葫蘆科植物有關(guān);亞細(xì)胞定位顯示CIMYB定位于細(xì)胞核,為典型的轉(zhuǎn)錄因子;成功構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體p Czn1-CIMYB,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌得到36 k D左右蛋白;CIMYB受枯萎病菌誘導(dǎo),在高抗枯萎病菌材料PI296341-FR中,相對感病品種表達(dá)量高峰出現(xiàn)的早,且表達(dá)量高。50μmol·L~(-1)的Me JA處理可以顯著提高感病材料Black diamond對枯萎病的抗病水平,同時(shí)誘導(dǎo)CIMYB表達(dá),與抗病材料PI296341-FR相比表達(dá)趨勢一致,但表達(dá)量更高�！窘Y(jié)論】CIMYB為典型的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子,亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核中;基因的原核表達(dá)得到36 k D的融合蛋白,在西瓜中的表達(dá)受枯萎病菌和茉莉酸誘導(dǎo),推測CIMYB可能參與JA介導(dǎo)的西瓜抗枯萎病防衛(wèi)反應(yīng)的信號通路,在西瓜抗病中起一定的作用。
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 西瓜 枯萎病 CIMYB轉(zhuǎn)錄因子 基因克隆 表達(dá)分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31201632) 河北省自然科學(xué)基金(C2016204138)
【分類號】：S436.5
【正文快照】： 導(dǎo)該基因表達(dá),并且先于PR21的誘導(dǎo),該基因編碼0引言蛋白可與PR21基因啟動子中的MYB結(jié)合位點(diǎn)特異性【研究意義】西瓜(Citrullus lanatus)是世界第結(jié)合,從而調(diào)節(jié)PR21的表達(dá)。在擬南芥和煙草中過五大水果,中國西瓜的栽培面積、總產(chǎn)量與人均消費(fèi)量表達(dá)AtM YB30,可以看到轉(zhuǎn)基因植株

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本文編號：772163