本文關(guān)鍵詞：殺粉蝶菌素A1生物合成基因簇中甲基轉(zhuǎn)移酶PieB2的功能

  更多相關(guān)文章： 殺粉蝶菌素A 甲基轉(zhuǎn)移酶 基因敲除 生物合成

【摘要】：【目的】研究殺粉蝶菌素A1產(chǎn)生菌中甲基轉(zhuǎn)移酶基因pieB2的功能�！痉椒ā坷媒雍限D(zhuǎn)移和同源重組雙交換的方法,構(gòu)建pieB2基因缺失突變株,以及利用接合轉(zhuǎn)移的方法,構(gòu)建回補菌株。通過高保真PCR克隆pieB2基因到表達載體pET28a上,構(gòu)建質(zhì)粒pJTU5997,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pLysE中誘導(dǎo)表達。利用高效液相色譜檢測PieB2的體外酶活�！窘Y(jié)果】獲得了pieB2基因缺失的雙交換突變株。發(fā)酵結(jié)果顯示,該突變株不再產(chǎn)生殺粉蝶菌素A1,而是積累了一種脫甲基產(chǎn)物。N-末端融合組氨酸標簽的PieB2在大腸桿菌中獲得可溶性表達,通過體外催化證明了PieB2甲基轉(zhuǎn)移酶的功能�！窘Y(jié)論】體內(nèi)遺傳實驗和體外生化實驗證明了PieB2作為甲基轉(zhuǎn)移酶在殺粉蝶菌素A1合成中的作用。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院微生物代謝國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 殺粉蝶菌素A 甲基轉(zhuǎn)移酶 基因敲除 生物合成
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31170085) 國家“973計劃”(2012CB721004)~~
【分類號】：TQ453;Q78
【正文快照】： 殺粉蝶菌素A1(Piericidin A1,圖1)是一種具2012年,上海交通大學(xué)聯(lián)合加州大學(xué)洛杉磯分校有良好生物活性的α-吡啶酮類天然產(chǎn)物,可由多在此菌株中克隆了殺粉蝶菌素A1生物合成基因種鏈霉菌產(chǎn)生[1]。它通過結(jié)合線粒體呼吸作用復(fù)簇,初步解析了其核心結(jié)構(gòu)α-吡啶酮的生物合成合體I,

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本文編號：750893