本文關(guān)鍵詞：小鼠白細胞介素IL-35基因慢病毒表達載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：[目的]構(gòu)建小鼠白細胞介素IL-35基因慢病毒表達載體并鑒定。[方法]通過PCR法擴增出小鼠IL-35基因片段,將其與經(jīng)XhoⅠ和XbaⅠ雙酶切的慢病毒載體pLVX-IRES-ZsGreen1連接,構(gòu)建慢病毒重組質(zhì)粒pLVX-IL-35-IRES-ZsGreen1。用無內(nèi)毒素試劑盒提取重組質(zhì)粒后,將其與病毒包裝所需的3個輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到人腎胚(HEK)293T細胞中包裝能表達IL-35的慢病毒顆粒。該病毒培養(yǎng)上清經(jīng)濃縮后,梯度稀釋法檢測其滴度。用濃縮后的病毒感染HEK293T細胞,然后通過熒光顯微鏡觀察熒光蛋白的表達并結(jié)合RT-PCR法檢測IL-35基因在該細胞中的表達。[結(jié)果]IL-35慢病毒表達載體構(gòu)建成功,包裝的慢病毒滴度為1×109TU/m L,通過熒光顯微鏡和RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)IL-35在HEK293T細胞中表達。[結(jié)論]成功構(gòu)建IL-35慢病毒表達載體且IL-35蛋白能在HEK293T細胞中過表達。
【作者單位】： 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究室;
【關(guān)鍵詞】： IL- 慢病毒 構(gòu)建 共轉(zhuǎn)染 鑒定
【分類號】：Q78
【正文快照】： 白細胞介素(interleukin,IL)-35是2007年命名的一種新型抗炎/免疫抑制細胞因子[1],是IL-12細胞因子家族的一員。它與IL-12家族其它成員IL-12、IL-23和IL-27一樣,均為異源二聚體蛋白。EB病毒誘導(dǎo)基因(Epstein-Barr virus-in-duced gene,EBI)3和IL-12p35(IL-12A)兩個亞基結(jié)合組

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1 李建民;穆健;周金山;;L-35高鉛玻管窯爐運行工藝的確定及特點[A];中國硅酸鹽學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會玻璃論文集[C];2003年

2 劉圈;;L-35高鉛玻管成型的影響因素及工藝調(diào)整對策[A];中國硅酸鹽學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2003年

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本文編號：747850