本文關(guān)鍵詞：少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶基因敲除及線蟲誘導捕器的活性物質(zhì)研究

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【摘要】：課題組前期研究表明一些細菌可以產(chǎn)生尿素誘導少孢節(jié)叢孢(Arthrobotrys oligospora)產(chǎn)生捕食器,并證實是尿素下游產(chǎn)物NH3發(fā)揮誘導功能。本論文通過對少孢節(jié)叢孢中的3個氨滲透酶基因AmtB80、AmtB43以及AmtB6進行敲除,初步探索NH3誘導少孢節(jié)叢孢產(chǎn)捕食器的分子機制。線蟲能誘導捕食線蟲真菌產(chǎn)生捕食器,本論文用活性追蹤法對秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)的代謝產(chǎn)物進行誘導活性物質(zhì)分離并對得到的活性物質(zhì)進行廣譜性測定,得到以下結(jié)果：1.用基因敲除技術(shù)敲除了少孢節(jié)叢孢中AmtB80,AmtB43以及AmtB6三個NH3滲透酶蛋白基因,得到三個敲除突變體AAmtB80、AAmtB43和AAmtB6,對三株敲除突變體和野生型菌進行了生長速率、菌落形態(tài)、線蟲誘導、NH3誘導、產(chǎn)孢量、抗?jié)B透壓比較。發(fā)現(xiàn),NH3誘導三株敲除株產(chǎn)生的捕食器都明顯低于野生型,產(chǎn)孢量分析顯示三株突變體產(chǎn)孢量明顯降低。其他的生長速率、菌落形態(tài)、線蟲誘導和抗?jié)B透壓沒有明顯變化。2.通過活性追蹤從秀麗隱桿線蟲(C. elegans)的代謝物中分離到化合物WF4-1,該化合物具有誘導捕器形成的活性。測定結(jié)果表明該化合物在0.02 mg/mL濃度下誘導效果最好,廣譜性分析發(fā)現(xiàn)WF4-1可以誘導6株不同的捕食線蟲真菌產(chǎn)生捕食器,其中卵形節(jié)叢孢YMF1.03316 (Arthrobotrys oviformis)、貴州節(jié)叢孢YMF1.00014 (Arthrobotrys guizhouensis)、少孢節(jié)叢孢YMF 1.01883 (Arthrobotrys oligospora)產(chǎn)生粘性網(wǎng),(Drechslerella effuse)YMF 1.00583、空環(huán)單頂孢YMF 1.01480(Drechslerella coelobrocha)產(chǎn)生收縮環(huán),長孢隔指孢YMF1.01460(Dactylelina leptospora)產(chǎn)生粘性球。全齒復活線蟲(Panagrellus redivevus)的代謝物的LC-MS檢測顯示全齒復活線蟲也可以產(chǎn)生WF4-1。本論文創(chuàng)新點：1.首次對少孢節(jié)叢孢中NH3滲透酶基因進行敲除。2.首次用活性追蹤法從線蟲中分離誘導捕食線蟲真菌產(chǎn)捕食器的活性物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：少孢節(jié)叢孢 NH_3滲透酶 線蟲 WF4-1
【學位授予單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q93
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 文獻綜述9-16
• 1 前言9-10
• 2 捕食線蟲真菌產(chǎn)生捕食器的誘導因素研究10-13
• 3 捕食線蟲真菌產(chǎn)捕食器分子機制的研究13-15
• 4 本論文的內(nèi)容和意義15-16
• 第二章 少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶AmtB80、AmtB43和AmtB6功能的初步研究16-48
• 1 前言16-17
• 2 實驗材料和方法17-29
• 2.1 實驗所用菌株和質(zhì)粒17
• 2.2 實驗所用培養(yǎng)基和緩沖液17-18
• 2.3 實驗所需試劑18
• 2.4 實驗儀器18
• 2.5 實驗方法18-29
• 3 實驗結(jié)果29-46
• 3.1 少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶的序列分析29-33
• 3.2 少孢節(jié)叢孢氨滲透酶的系統(tǒng)發(fā)育分析33-35
• 3.3 少孢節(jié)叢孢氨氣滲透酶相關(guān)基因同源重組載體的構(gòu)建35-37
• 3.4 轉(zhuǎn)化子的篩選和PCR驗證37-39
• 3.5 野生菌株和敲除菌株的比較39-46
• 4 小結(jié)與討論46-48
• 第三章 秀麗隱桿線蟲誘導捕食線蟲真菌產(chǎn)捕食器活性物質(zhì)的分離48-66
• 1 前言48-49
• 2 實驗材料和方法49-56
• 2.1 所用線蟲和菌株49
• 2.2 實驗所用培養(yǎng)基和試劑49
• 2.3 實驗所用儀器49-50
• 2.4 實驗方法50-56
• 3 實驗結(jié)果56-64
• 3.1 粗分樣品對少孢節(jié)叢孢產(chǎn)捕器活性的誘導56-58
• 3.2 化合物的鑒定結(jié)果58-59
• 3.3 化合物WF4-1的梯度活性測定59-61
• 3.4 WF4-1廣譜性測定61-64
• 4 小結(jié)與討論64-66
• 全文總結(jié)66-67
• 附錄67-70
• 參考文獻70-75
• 碩士研究生期間科研成果75-76
• 致謝76

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本文編號：746424