本文關(guān)鍵詞：少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶基因敲除及線蟲(chóng)誘導(dǎo)捕器的活性物質(zhì)研究

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【摘要】：課題組前期研究表明一些細(xì)菌可以產(chǎn)生尿素誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢(Arthrobotrys oligospora)產(chǎn)生捕食器,并證實(shí)是尿素下游產(chǎn)物NH3發(fā)揮誘導(dǎo)功能。本論文通過(guò)對(duì)少孢節(jié)叢孢中的3個(gè)氨滲透酶基因AmtB80、AmtB43以及AmtB6進(jìn)行敲除,初步探索NH3誘導(dǎo)少孢節(jié)叢孢產(chǎn)捕食器的分子機(jī)制。線蟲(chóng)能誘導(dǎo)捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)生捕食器,本論文用活性追蹤法對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)(Caenorhabditis elegans)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行誘導(dǎo)活性物質(zhì)分離并對(duì)得到的活性物質(zhì)進(jìn)行廣譜性測(cè)定,得到以下結(jié)果：1.用基因敲除技術(shù)敲除了少孢節(jié)叢孢中AmtB80,AmtB43以及AmtB6三個(gè)NH3滲透酶蛋白基因,得到三個(gè)敲除突變體AAmtB80、AAmtB43和AAmtB6,對(duì)三株敲除突變體和野生型菌進(jìn)行了生長(zhǎng)速率、菌落形態(tài)、線蟲(chóng)誘導(dǎo)、NH3誘導(dǎo)、產(chǎn)孢量、抗?jié)B透壓比較。發(fā)現(xiàn),NH3誘導(dǎo)三株敲除株產(chǎn)生的捕食器都明顯低于野生型,產(chǎn)孢量分析顯示三株突變體產(chǎn)孢量明顯降低。其他的生長(zhǎng)速率、菌落形態(tài)、線蟲(chóng)誘導(dǎo)和抗?jié)B透壓沒(méi)有明顯變化。2.通過(guò)活性追蹤從秀麗隱桿線蟲(chóng)(C. elegans)的代謝物中分離到化合物WF4-1,該化合物具有誘導(dǎo)捕器形成的活性。測(cè)定結(jié)果表明該化合物在0.02 mg/mL濃度下誘導(dǎo)效果最好,廣譜性分析發(fā)現(xiàn)WF4-1可以誘導(dǎo)6株不同的捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)生捕食器,其中卵形節(jié)叢孢YMF1.03316 (Arthrobotrys oviformis)、貴州節(jié)叢孢YMF1.00014 (Arthrobotrys guizhouensis)、少孢節(jié)叢孢YMF 1.01883 (Arthrobotrys oligospora)產(chǎn)生粘性網(wǎng),(Drechslerella effuse)YMF 1.00583、空環(huán)單頂孢YMF 1.01480(Drechslerella coelobrocha)產(chǎn)生收縮環(huán),長(zhǎng)孢隔指孢YMF1.01460(Dactylelina leptospora)產(chǎn)生粘性球。全齒復(fù)活線蟲(chóng)(Panagrellus redivevus)的代謝物的LC-MS檢測(cè)顯示全齒復(fù)活線蟲(chóng)也可以產(chǎn)生WF4-1。本論文創(chuàng)新點(diǎn)：1.首次對(duì)少孢節(jié)叢孢中NH3滲透酶基因進(jìn)行敲除。2.首次用活性追蹤法從線蟲(chóng)中分離誘導(dǎo)捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)捕食器的活性物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：少孢節(jié)叢孢 NH_3滲透酶 線蟲(chóng) WF4-1
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q93
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-16
• 1 前言9-10
• 2 捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)生捕食器的誘導(dǎo)因素研究10-13
• 3 捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)捕食器分子機(jī)制的研究13-15
• 4 本論文的內(nèi)容和意義15-16
• 第二章 少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶AmtB80、AmtB43和AmtB6功能的初步研究16-48
• 1 前言16-17
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法17-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)所用菌株和質(zhì)粒17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基和緩沖液17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)所需試劑18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法18-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-46
• 3.1 少孢節(jié)叢孢中氨滲透酶的序列分析29-33
• 3.2 少孢節(jié)叢孢氨滲透酶的系統(tǒng)發(fā)育分析33-35
• 3.3 少孢節(jié)叢孢氨氣滲透酶相關(guān)基因同源重組載體的構(gòu)建35-37
• 3.4 轉(zhuǎn)化子的篩選和PCR驗(yàn)證37-39
• 3.5 野生菌株和敲除菌株的比較39-46
• 4 小結(jié)與討論46-48
• 第三章 秀麗隱桿線蟲(chóng)誘導(dǎo)捕食線蟲(chóng)真菌產(chǎn)捕食器活性物質(zhì)的分離48-66
• 1 前言48-49
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法49-56
• 2.1 所用線蟲(chóng)和菌株49
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基和試劑49
• 2.3 實(shí)驗(yàn)所用儀器49-50
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法50-56
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-64
• 3.1 粗分樣品對(duì)少孢節(jié)叢孢產(chǎn)捕器活性的誘導(dǎo)56-58
• 3.2 化合物的鑒定結(jié)果58-59
• 3.3 化合物WF4-1的梯度活性測(cè)定59-61
• 3.4 WF4-1廣譜性測(cè)定61-64
• 4 小結(jié)與討論64-66
• 全文總結(jié)66-67
• 附錄67-70
• 參考文獻(xiàn)70-75
• 碩士研究生期間科研成果75-76
• 致謝76

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