本文關(guān)鍵詞：水稻細(xì)胞色素P450基因家族成員CYP81A6基因RNAi載體構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 水稻 CYPA RNA干涉 基因克隆

【摘要】：水稻P450基因家族成員CYP81A6參與稻瘟病抗性反應(yīng),為了深入研究該基因的功能,本研究利用3次克隆的策略構(gòu)建了該基因的RNAi載體。首先設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)的基因特異性引物,以c DNA為模板擴(kuò)增3'非翻譯區(qū)的特異片斷,將目的產(chǎn)物連接到T載體上,經(jīng)菌落PCR和酶切鑒定后進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表示,目的片斷已正確克隆到T載體上。然后利用雙酶切通過(guò)2次亞克隆將目的片斷以反向重復(fù)克隆到RNAi載體ds1301,通過(guò)分子檢測(cè)表明,CYP81A6的RNAi載體構(gòu)建成功,有助于后續(xù)的基因功能和作用機(jī)理的研究。
【作者單位】： 中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院武陵山區(qū)特色資源植物種質(zhì)保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物技術(shù)國(guó)家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 水稻 CYPA RNA干涉 基因克隆
【基金】：國(guó)家轉(zhuǎn)基因重大專(zhuān)項(xiàng)(2014ZX0800904B) 國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31370306)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2
【正文快照】： 細(xì)胞色素P450(CYPs)代表著一個(gè)很大的可自身氧化的亞鐵血紅素蛋白家族,屬于單氧酶的一類(lèi),因其在450 nm有特異吸收峰而得名。它是以還原態(tài)與CO結(jié)合后在波長(zhǎng)450 nm處有吸收峰,同時(shí)也是一類(lèi)具有混合功能的血紅素氧化酶系,其廣泛分布于動(dòng)物、微生物和植物體內(nèi)(Bak et al.,2000;Lv

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