本文關(guān)鍵詞：RIPK3基因轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞中HIF-1α基因及其信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)變化

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【摘要】：目的觀察受體相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因轉(zhuǎn)染的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y中低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)mRNA及其信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)變化。方法構(gòu)建表達(dá)RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP質(zhì)粒(重組質(zhì)粒),培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,分別轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒和空載質(zhì)粒。采用Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中的RIPK3蛋白,分別于培養(yǎng)8、14、20、26、32、38 h后,通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況(OD值)。采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)軟件檢測(cè)并篩選RIPK3-HIF1α下游信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因。采用微滴式數(shù)字PCR(dd PCR)檢測(cè)兩組細(xì)胞中的HIF-1αmRNA。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中RIPK3蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.806±0.097 5)高于對(duì)照組(0.455±0.088 6),P0.05。隨培養(yǎng)時(shí)間延長,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖受到抑制。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中HIF-1αmRNA相對(duì)表達(dá)量(0.015 43±0.003 47)低于對(duì)照組(0.046 28±0.010 26),P0.05。在HIF-1α為核心的相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)中,篩選出關(guān)鍵分子泛素綴合酶樣蛋白(UBC)、希佩爾-林道蛋白(VHL)、轉(zhuǎn)錄延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)。結(jié)論 RIPK3基因轉(zhuǎn)染SH-SY5Y后,細(xì)胞中HIF-1αmRNA表達(dá)下調(diào),同時(shí)HIF-1α信號(hào)通路相關(guān)基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表達(dá)水平受到影響。
【作者單位】： 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院腦科醫(yī)院;武警后勤學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 神經(jīng)母細(xì)胞瘤 受體相互作用蛋白激酶 低氧誘導(dǎo)因子α 泛素綴合酶樣蛋白 希佩爾-林道蛋白 轉(zhuǎn)錄延伸因子B多肽 血管內(nèi)皮生長因子A
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31200809) 武警部隊(duì)后勤科研項(xiàng)目(WJHQ2012-20)
【分類號(hào)】：R739.4
【正文快照】： 受體相互作用蛋白激酶3(RIPK3)屬于受體相互作用蛋白家族(RIPs)成員。作為腫瘤壞死因子(TNF)重要的下游效應(yīng)分子,RIPK3廣泛表達(dá)于人體各組織,并被證實(shí)在細(xì)胞增殖、凋亡過程中發(fā)揮重要作用[1~4]。低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)表達(dá)于所有已知的多細(xì)胞物種[5],是組織適應(yīng)缺氧環(huán)境的

【相似文獻(xiàn)】

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1 黃強(qiáng),孫立軍,董軍,李曉楠,王愛東,蘭青;人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株體外誘導(dǎo)分化相關(guān)基因的初步研究[J];癌癥;2003年07期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林偉;MSP58基因在人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤增殖和侵襲中的作用及其機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 孫立軍;人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化基因譜的建立及相關(guān)基因的克隆[D];蘇州大學(xué);2001年

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本文編號(hào)：719171