本文關(guān)鍵詞：利用實時熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)基因水稻外源基因拷貝數(shù)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

利用實時熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)基因水稻外源基因拷貝數(shù)的研究(1)

     摘 要：轉(zhuǎn)基因植物中外源基因拷貝數(shù)是影響目的基因表達水平和遺傳穩(wěn)定性的重要因素，因此外源基因拷貝數(shù)的檢測成為轉(zhuǎn)基因研究的關(guān)鍵，利用高通量、快速、靈敏的SYBR Grcen I熒光定量實時PCR法，檢測了轉(zhuǎn)大麥煙酰胺合成酶基因(NAS1)水稻中外源基因拷貝數(shù)，以蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作為水稻的內(nèi)源參照基因，通過梯度稀釋法，分別獲得了NA51和SPS基因的Ct值與起始模板數(shù)的相關(guān)性標準曲線，相關(guān)系數(shù)分別為0.99976和0.99571，相關(guān)性高，通過目的基因NASl和水稻內(nèi)源參照基因SPS起始模板數(shù)的比較，獲得了目的基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的拷貝數(shù)，在8株轉(zhuǎn)基因株系中，1株為假陽性，1株拷貝數(shù)為1，，3株拷貝數(shù)為2，其余3株拷貝數(shù)分別為3、4和7，而陰性對照拷貝數(shù)為0，這種方法快速、簡便、準確，可以滿足轉(zhuǎn)基因育種工作中對后代優(yōu)良株系的選擇。

    關(guān)鍵詞：SYBR Creen I實時熒光定量PCR；煙酰胺合成酶基因；轉(zhuǎn)基因水稻；拷貝數(shù)

    中圖分類號：Q503 文獻標識碼：A 文章編號：1007-7847(2007)04-0301-05

    植物遺傳轉(zhuǎn)化是作物改良和新基因功能鑒定的常用方法 ......

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