發(fā)布時間：2017-08-17 20:20

  本文關(guān)鍵詞：蘋果MpSnRK2.4基因的克隆及轉(zhuǎn)化

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【摘要】：【目的】從常用蘋果砧木楸子中克隆MpSnRK2.4基因,并將其轉(zhuǎn)化番茄(Lycopersicon esculentum)品種Micro-Tom,為研究其功能奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā恳蚤弊佑兹~為材料,通過RT-PCR擴(kuò)增獲得MpSnRK2.4基因的完整開放閱讀框序列;利用Gateway技術(shù)構(gòu)建pGWB411-SnRK2.4植物過表達(dá)載體,通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將此載體轉(zhuǎn)入Micro-Tom番茄中,通過卡那霉素篩選和轉(zhuǎn)基因番茄RT-PCR鑒定,獲得陽性轉(zhuǎn)基因株系,利用qRT-PCR技術(shù)研究不同轉(zhuǎn)基因株系中MpSnRK2.4基因的表達(dá)水平。【結(jié)果】成功克隆到長度為1 220bp的MpSnRK2.4基因片段,該基因包含長1 026bp的完整開放閱讀框,編碼341個氨基酸殘基。通過在線軟件分析發(fā)現(xiàn),該基因的gDNA序列包含8個內(nèi)含子,9個外顯子;預(yù)測編碼蛋白MpSnRK2.4的分子質(zhì)量為38.475ku,理論等電點(diǎn)(pI)為6.06。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,MpSnRK2.4與水稻OsSAPK3蛋白的親緣關(guān)系最近,序列比對顯示MpSnRK2.4蛋白與已知的其他植物SnRK2s蛋白序列具有較高的同源性。轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR鑒定結(jié)果表明,MpSnRK2.4基因已成功轉(zhuǎn)入番茄植株中,經(jīng)qRT-PCR發(fā)現(xiàn),不同轉(zhuǎn)基因株系的MpSnRK2.4基因表達(dá)量存在差異,其中株系1的表達(dá)水平最高�！窘Y(jié)論】克隆獲得了MpSnRK2.4基因全長序列,并得到了10個含有該基因的Micro-Tom番茄轉(zhuǎn)基因株系。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 楸子 SnRK 基因克隆 轉(zhuǎn)基因
【基金】：“十二五”國家科技計劃項(xiàng)目“早中熟優(yōu)質(zhì)多抗蘋果、梨新品種、砧木選育研究”(2013BAD02B01-2)
【分類號】：S661.1
【正文快照】： 蛋白質(zhì)的可逆磷酸化是植物在非生物脅迫下體內(nèi)能量代謝和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要機(jī)制[1]。這個過程涉及到眾多的磷酸酯酶和蛋白激酶,其中蔗糖非發(fā)酵相關(guān)蛋白激酶家族2(Sucrose non-fermenting-relat-ed protein kinase 2,SnRK2)是一個相對較小的植物專一性絲氨酸/絲氨酸蛋白激酶家族。

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡銀崗;林凡云;王士強(qiáng);何蓓如;;糜子抗旱節(jié)水相關(guān)基因PmMYB的克隆及表達(dá)分析[J];遺傳;2008年03期

2 李順成,龐有志;天然基因克隆的制備[J];洛陽農(nóng)專學(xué)報;1994年02期

3 劉羽;趙傳志;李長生;李翠;王興軍;;花生HIR基因的克隆表達(dá)與進(jìn)化分析[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年05期

4 馬現(xiàn)永,曹永長,舒鼎銘,畢英佐;肌肉生成抑制因子基因的克隆、表達(dá)及動物免疫實(shí)驗(yàn)[J];中國科學(xué)C輯:生命科學(xué);2004年06期

5 劉文榮;張木清;;抑制性消減雜交技術(shù)在植物基因克隆中的應(yīng)用[J];亞熱帶農(nóng)業(yè)研究;2006年02期

6 史仁玖;殷s，

本文編號：690912