本文關(guān)鍵詞：華山松大小蠹熱激蛋白基因克隆與定量表達(dá)

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【摘要】：熱休克蛋白是一種抗逆蛋白,該蛋白與昆蟲(chóng)對(duì)高溫和低溫的耐受性密切關(guān)聯(lián),同時(shí)熱休克蛋白在昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。華山松大小蠹是危害我國(guó)秦嶺巴山林區(qū)的重要蛀干性害蟲(chóng)。本研究以華山松大小蠹為研究對(duì)象,旨在通過(guò)對(duì)華山松大小蠹熱激蛋白基因克隆和定量表達(dá),研究其在不同溫度和不同時(shí)間脅迫下熱激蛋白基因表達(dá)量的差異,揭示華山松大小蠹熱激蛋白基因?qū)囟茸兓捻憫?yīng)與調(diào)控作用,初步探討華山松大小蠹對(duì)溫度脅迫的適應(yīng)機(jī)制,為華山松大小蠹種群數(shù)量動(dòng)態(tài)和可持續(xù)控制提供新思路。研究取得的主要結(jié)果如下:1.克隆了16條華山松大小蠹熱激蛋白基因,其中Hsp70家族8條,Hsp90家族2條,sHsp家族6條,并上傳GeneBank并獲得登錄號(hào)。2.華山松大小蠹Hsps基因與赤擬谷盜同源性最高(68%),與其他鱗翅目,膜翅目等昆蟲(chóng)也具有較高同源性,說(shuō)明Hsps具有高度保守性。3.高溫和低溫脅迫下華山松大小蠹成蟲(chóng)體內(nèi)Hsps基因表達(dá)變化顯著,隨著溫度的升高或降低,表達(dá)量均會(huì)上調(diào),但超過(guò)一定溫度后表達(dá)量下降到最初水平;高溫脅迫時(shí)Hsp70基因變化最顯著,低溫脅迫時(shí)sHsp基因變化顯著。4.華山松大小蠹雌蟲(chóng)對(duì)溫度的敏感度大于雄蟲(chóng),而雄蟲(chóng)能適應(yīng)的溫度范圍更寬;在不同溫度和時(shí)間處理下華山松大小蠹雄蟲(chóng)體內(nèi)DAHsp70-8基因表達(dá)差異不顯著,而在雌蟲(chóng)則差異顯著,這說(shuō)明DAHsp70-8可能與華山松大小蠹雌蟲(chóng)特有的生命活動(dòng)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：華山松大小蠹 熱激蛋白 基因克隆定量表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S763.38
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1.1 華山松大小蠹研究進(jìn)展9-11
• 1.1.1 華山松大小蠹的發(fā)生與危害9
• 1.1.2 華山松大小蠹的生物學(xué)特性9-10
• 1.1.3 華山松大小蠹與寄主華山松的相互關(guān)系10
• 1.1.4 華山松大小蠹與共生真菌的相互關(guān)系10-11
• 1.2 溫度對(duì)昆蟲(chóng)的影響11-13
• 1.2.1 溫度對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響12-13
• 1.2.2 溫度對(duì)昆蟲(chóng)地理分布和種群數(shù)量影響13
• 1.3 熱激蛋白的研究進(jìn)展13-17
• 1.3.1 誘導(dǎo)Hsps表達(dá)的脅迫因子13-14
• 1.3.2 Hsp的分類(lèi)14
• 1.3.3 Hsp特點(diǎn)14
• 1.3.4 Hsp的基因表達(dá)調(diào)控14-15
• 1.3.5 Hsp生物學(xué)功能15-16
• 1.3.6 熱激蛋白的應(yīng)用16-17
• 1.4 研究?jī)?nèi)容與目的意義17-19
• 1.4.1 研究目的意義17-18
• 1.4.2 研究?jī)?nèi)容18-19
• 第二章 材料與方法19-27
• 2.1 供試?yán)ハx(chóng)19
• 2.2 儀器設(shè)備與試劑（試劑盒）19-21
• 2.2.1 主要儀器19-20
• 2.2.2 試劑及藥品20
• 2.2.3 引物20-21
• 2.3 試驗(yàn)方法21-24
• 2.3.1 華山松大小蠹總RNA提取21
• 2.3.2 第一鏈cDNA形成21-22
• 2.3.3 PCR擴(kuò)增22
• 2.3.4 PCR產(chǎn)物純化22-23
• 2.3.5 連接與轉(zhuǎn)化23
• 2.3.6 檢測(cè)與測(cè)序23-24
• 2.4 系統(tǒng)發(fā)育分析24
• 2.5 Hsps基因的定量表達(dá)24-27
• 2.5.1 試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)24-25
• 2.5.2 總RNA提取及cDNA合成25
• 2.5.3 華山松大小蠹定量引物設(shè)計(jì)與驗(yàn)證25-26
• 2.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)26
• 2.5.5 數(shù)據(jù)分析26-27
• 第三章 結(jié)果與分析27-51
• 3.1 華山松大小蠹Hsps基因的克隆與序列分析27-29
• 3.1.1 華山松大小蠹Hsps基因克隆27
• 3.1.2 系統(tǒng)發(fā)育分析27-29
• 3.2 華山松大小蠹成蟲(chóng)Hsps實(shí)時(shí)熒光定量PCR29-33
• 3.2.1 定量引物及退火溫度篩選29-31
• 3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備31-33
• 3.3 高溫脅迫下華山松大小蠹成蟲(chóng)Hsps基因表達(dá)量33-41
• 3.3.1 華山松大小蠹Hsp70家族表達(dá)量33-36
• 3.3.2 華山松大小蠹Hsp90家族表達(dá)量36-38
• 3.3.3 華山松大小蠹sHsp家族表達(dá)量38-40
• 3.3.4 小結(jié)40-41
• 3.4 低溫脅迫下華山松大小蠹成蟲(chóng)Hsps基因表達(dá)量41-51
• 3.4.1 華山松大小蠹Hsp 70家族基因表達(dá)量41-45
• 3.4.2 華山松大小蠹Hsp 90家族基因表達(dá)量45-47
• 3.4.3 華山松大小蠹sHsp家族基因表達(dá)量47-49
• 3.4.4 小結(jié)49-51
• 第四章 討論與結(jié)論51-55
• 4.1 討論51-54
• 4.1.1 華山松大小蠹Hsps基因克隆及分析51
• 4.1.2 高溫脅迫下華山松大小蠹成蟲(chóng)體內(nèi)Hsps基因表達(dá)水平51-53
• 4.1.3 低溫脅迫下華山松大小蠹成蟲(chóng)體內(nèi)Hsps基因表達(dá)水平53-54
• 4.2 結(jié)論54
• 4.3 展望54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 作者簡(jiǎn)介61

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