發(fā)布時(shí)間：2017-08-11 09:11

  本文關(guān)鍵詞：PRKCI基因在急性心肌梗死患者中低表達(dá)及其功能驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 心肌梗死 PRKCI基因 大鼠心肌細(xì)胞 干擾載體 低密度脂蛋白

【摘要】：目的:通過(guò)擴(kuò)大樣本量明確PRKCI基因在急性心肌梗死患者外周血白細(xì)胞中低表達(dá),利用RNA干擾技術(shù)檢測(cè)PRKCI低表達(dá)大鼠心肌細(xì)胞低密度脂蛋白的分泌情況,并對(duì)其變化進(jìn)行分析。方法:(1)隨機(jī)選取吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院心血管內(nèi)科2014年11月-2015年1月明確診斷為急性心肌梗死的患者20例為實(shí)驗(yàn)組,20例正常者為對(duì)照組,所有受試者抽取晨起空腹靜脈血6ml。以6ml靜脈血為樣本進(jìn)行RNA及蛋白提取,分別從RNA水平及蛋白水平對(duì)其進(jìn)行PRKCI蛋白表達(dá)量的檢測(cè),并對(duì)PRKCI基因進(jìn)行功能分析。(2)利用RNA干擾技術(shù)特異性減低大鼠離體心肌細(xì)胞內(nèi)源性PRKCI基因的表達(dá)。用PRKCI干擾載體及空白對(duì)照載體分別轉(zhuǎn)染離體大鼠心肌細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后于倒置的熒光顯微鏡下初步檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后分別提取被轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞的總RNA及總蛋白,利用RT-PCR及Western Blot方法對(duì)其進(jìn)行PRKCI基因表達(dá)量的檢測(cè),并分別以GAPDH基因及β-actin基因?yàn)閮?nèi)參基因。同時(shí),在轉(zhuǎn)染前、轉(zhuǎn)染后12小時(shí)、轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、轉(zhuǎn)染后36小時(shí)、轉(zhuǎn)染后48小時(shí)分別留取各轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)基,利用Elisa法檢測(cè)培養(yǎng)基中低密度脂蛋白濃度。結(jié)果:(1)兩組研究對(duì)象在低密度脂蛋白膽固醇及高密度脂蛋白膽固醇水平上存在明顯差異,急性心肌梗死組的低密度脂蛋白膽固醇濃度較高,高密度脂蛋白膽固醇濃度較低。在RNA水平上,急性心肌梗死組PRKCI基因的相對(duì)表達(dá)量為0.62±0.11(P=0.032);在蛋白水平,急性心肌梗死組PRKCI蛋白的表達(dá)量也明顯減低。通路分析發(fā)現(xiàn)PRKCI基因參與胰島素通路、血小板激活通路、wnt信號(hào)通路等多條信號(hào)通路。(2)倒置的熒光顯微鏡下可見(jiàn)干擾載體及空白對(duì)照載體均成功轉(zhuǎn)染至大鼠心肌細(xì)胞,且轉(zhuǎn)染效率無(wú)明顯差異。在RNA水平上,PRKCI干擾組較對(duì)照組PRKCI基因的相對(duì)表達(dá)量為0.3185±0.058(P=0.032);在蛋白水平,PRKCI干擾組較對(duì)照組PRKCI基因蛋白的表達(dá)量也明顯減低。在低密度脂蛋白水平上,PRKCI干擾組的濃度分別為4.043±0.372ug/m L、4.833±0.0898ug/m L、5.324±0.211ug/m L、6.023±0.131ug/m L、5.585±0.569ug/m L,對(duì)照組為4.123±0.140ug/m L、4.103±0.311ug/m L、3.987±0.133ug/m L、4.191±0.0716ug/m L、3.891±0.160ug/m L。由此可見(jiàn),隨著時(shí)間的推移,PRKCI干擾組LDL水平隨時(shí)間延長(zhǎng)濃度逐步升高,并于30-40小時(shí)達(dá)到峰值,而對(duì)照組LDL未見(jiàn)明顯改變。結(jié)論:急性心肌梗死患者外周血白細(xì)胞中,PRKCI基因低表達(dá)。在H9C2細(xì)胞中PRKCI基因低表達(dá)促進(jìn)LDL合成。PRKCI基因低表達(dá)導(dǎo)致LDL合成增加,可能是誘發(fā)急性心肌梗死的原因之一。
【關(guān)鍵詞】：心肌梗死 PRKCI基因 大鼠心肌細(xì)胞 干擾載體 低密度脂蛋白
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 引言14-16
• 第2章 文獻(xiàn)綜述16-25
• 第3章 研究?jī)?nèi)容25-53
• 第一部分PRKCI基因在急性心肌梗死患者中表達(dá)檢測(cè)25-40
• 1.1 研究對(duì)象25-26
• 1.2 研究材料及設(shè)備26-27
• 1.3 研究方法27-36
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36-37
• 1.5 結(jié)果37-40
• 第二部分PRKCI基因在H9C2中的功能研究40-48
• 2.1 研究對(duì)象40
• 2.2 研究材料及設(shè)備40-41
• 2.3 研究方法41-43
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43-44
• 2.5 結(jié)果44-48
• 第4章 討論48-52
• 第5章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 作者簡(jiǎn)介59-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 Xuming Dai;Szymon Wiernek;James P Evans;Marschall S Runge;;Genetics of coronary artery disease and myocardial infarction[J];World Journal of Cardiology;2016年01期

2 陳偉偉;高潤(rùn)霖;劉力生;朱曼璐;王文;王擁軍;吳兆蘇;李惠君;鄭哲;蔣立新;胡盛壽;;《中國(guó)心血管病報(bào)告2014》概要[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2015年07期

3 郭旭東;李相冬;呂曉亮;趙平;姜彥陽(yáng);孟繁波;;基因芯片分析急性心肌梗死患者外周血差異基因表達(dá)譜[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2015年06期

4 ;急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南[J];中華心血管病雜志;2015年05期

5 徐立;楊新春;王樂(lè)豐;葛永貴;王紅石;李惟銘;倪祝華;劉宇;崔亮;;提前應(yīng)用替羅非班對(duì)急性ST段抬高心肌梗死患者急診介入治療療效的影響[J];中華心血管病雜志;2006年11期

6 ;急性ST段抬高心肌梗死溶栓治療中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)(2009年版)[J];中華內(nèi)科雜志;2009年10期

7 馬禮坤;余華;馮克福;施有為;張曉紅;戴小華;高潮;唐寶龍;程志祥;陳鴻武;夏銘蔚;韓曉萍;葉琪;嚴(yán)激;;急性心肌梗死經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)行直接冠狀動(dòng)脈介入治療的安全性及臨床療效[J];中華心血管病雜志;2008年06期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 許鑫;趨化因子及其受體基因多態(tài)性與心肌梗死發(fā)生的相關(guān)性研究[D];浙江大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：655281