本文關(guān)鍵詞：成都地區(qū)犬源大腸桿菌毒力相關(guān)基因、耐藥性及系統(tǒng)進(jìn)化組的研究

  更多相關(guān)文章： 犬 大腸桿菌 毒力基因 耐藥性 耐藥基因 系統(tǒng)進(jìn)化組

【摘要】：為了解成都地區(qū)犬源大腸桿菌毒力相關(guān)基因、耐藥性和系統(tǒng)進(jìn)化組的分布情況,本研究采集犬肛拭子樣本進(jìn)行了大腸桿菌的分離鑒定,并對(duì)臨床分離株的13種毒力相關(guān)基因進(jìn)行PCR檢測(cè),以及其對(duì)常用抗生素敏感性進(jìn)行測(cè)定。采用已建立的PCR方法對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、氯霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)的主要耐藥基因進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)耐藥性及耐藥基因的符合率進(jìn)行分析。本研究主要取得以下成果:1.通過(guò)對(duì)175份犬肛拭子樣本進(jìn)行分離鑒定,共分離到156株大腸桿菌。其中104株分離自臨床健康犬樣本,52株分離自腹瀉樣本,總分離率為89.14%。血清型鑒定結(jié)果表明:犬源大腸桿菌血清型分布散在,無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)血清型。除毒力基因cvaC未檢出外,fimC、sitA和ompT基因在臨床健康分離株和腹瀉分離株的檢出率均超過(guò)40%。腹瀉分離株iroN、tsh、iss和hlyA基因的檢出率顯著或極顯著高于臨床健康分離株,據(jù)此推測(cè),犬大腸桿菌病的發(fā)生可能與E.coli所攜帶的毒力基因有關(guān)。2.對(duì)156株犬源大腸桿菌對(duì)常用抗生素敏感性進(jìn)行測(cè)定。其中,耐藥率最高為頭孢喹肟和林可霉素,分別為100%和97.4%,其次是氨芐西林和阿莫西林達(dá)到73.1%和69.9%,美羅培南和粘菌素耐藥最低,為4.5%和5.8%,其它抗生素耐藥率在20%~60%。3耐及以上的耐藥菌株占95.51%(149/156),7耐所占比例最大(12.18%,19/156),其次為9耐(10.90%,17/156)、14耐(10.90%,17/156)、10耐(9.62%,15/156)和5耐(8.33%,13/156)。3.采用已建立的PCR檢測(cè)方法,對(duì)156株犬源大腸桿菌5類(lèi)17種耐藥基因進(jìn)行檢測(cè),β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因blaCTX-M、blaTEM檢測(cè)率最高,分別為89.74%,78.84%;其次是磺胺類(lèi)耐藥基因Sul3檢出率為63.46%;喹諾酮類(lèi)耐藥基因aac(6′)-Ib、OqxAB和qnrS檢出率分別為18.59%、35.26%和26.92%;氨基糖苷類(lèi)耐藥基因aadA、aacC2、aacC4和aphA3檢出率分別為23.07%、55.77%、8.97%和26.28%。對(duì)測(cè)得的耐藥表型和耐藥基因進(jìn)行符合率比較,156株犬源大腸桿菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)和氯霉素類(lèi)抗生素藥敏耐藥表型結(jié)果與耐藥基因的檢測(cè)結(jié)果有很高的符合率(≥81%),符合率分別為89.15%、100%、81.31%和91.42%。本研究對(duì)犬源大腸桿菌β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、氯霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)5類(lèi)抗生素主要耐藥基因進(jìn)行檢測(cè),豐富了犬源大腸桿菌耐藥基因的流行病學(xué)資料。4.為進(jìn)一步了解犬源大腸桿菌菌株的遺傳起源及分子特性,采用3重PCR方法對(duì)臨床分離株進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化組分析。菌株主要分布于A(yíng)組(35.40%,59/156);其次D組(29.49%,46/156)和B1組(20.51%,32/156);B2組菌株分布最少(12.18%,19/15),B2和D兩組腸桿菌占總分離數(shù)的41.67%(65/156)。犬源大腸桿菌致病群(B2組和D組)和共生群(A組和B1群)分離菌株對(duì)氟喹諾酮類(lèi)抗生素耐藥率差異顯著(P0.05)。犬源大腸桿菌毒力相關(guān)基因雖在各系統(tǒng)發(fā)育均有分布,但B2組的毒力基因平均數(shù)高于其他系統(tǒng)進(jìn)化組。
【關(guān)鍵詞】：犬 大腸桿菌 毒力基因 耐藥性 耐藥基因 系統(tǒng)進(jìn)化組
【學(xué)位授予單位】：西南民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略語(yǔ)表8-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-19
• 1 大腸桿菌的流行情況12-13
• 2 大腸桿菌耐藥性研究進(jìn)展13-16
• 2.1 大腸桿菌的耐藥現(xiàn)狀13-14
• 2.2 大腸桿菌耐藥性的檢測(cè)方法14-15
• 2.3 大腸桿菌耐藥性的消除方法15-16
• 3 致病性大腸桿菌的研究進(jìn)展16-17
• 3.1 大腸桿菌的血清型16
• 3.2 大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化組研究16-17
• 3.3 大腸桿菌毒力因子17
• 4 選題目的、意義和主要內(nèi)容17-19
• 4.1 犬源大腸桿菌研究存在的問(wèn)題17
• 4.2 研究目的、意義和主要內(nèi)容17-19
• 第二章 犬源大腸桿菌的分離鑒定及相關(guān)毒力基因PCR檢測(cè)19-36
• 1 材料19-20
• 1.1 樣本來(lái)源19
• 1.2 主要試劑19-20
• 1.3 主要儀器20
• 2 方法20-25
• 2.1 犬源大腸桿菌的分離鑒定20
• 2.2 犬源大腸桿菌 16S rRNA基因序列測(cè)定20-21
• 2.3 犬源大腸桿菌O抗原血清鑒定21
• 2.4 細(xì)菌DNA的制備21
• 2.5 引物來(lái)源與合成21-23
• 2.6 犬源大腸桿菌13種相關(guān)毒力基因的PCR檢測(cè)23-25
• 3 結(jié)果25-34
• 3.1 犬源大腸桿菌的分離鑒定結(jié)果25-26
• 3.2 犬源大腸桿菌 16sRNA基因序列測(cè)定26
• 3.3 156株犬源大腸桿菌O血清型鑒定結(jié)果26-27
• 3.4 犬源大腸桿菌13個(gè)毒力基因的PCR檢測(cè)結(jié)果27-33
• 3.5 犬源大腸桿菌毒力基因的分布33-34
• 4 討論34-35
• 5 小結(jié)35-36
• 第三章 犬源大腸桿菌耐藥性及耐藥基因的檢測(cè)36-54
• 1 材料36-37
• 1.1 菌株來(lái)源36
• 1.2 抗菌藥物36-37
• 1.3 主要試劑37
• 1.4 主要儀器37
• 2 方法37-40
• 2.1 最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定37-38
• 2.2 耐藥基因PCR檢測(cè)38-40
• 2.3 藥敏試驗(yàn)與耐藥基因檢測(cè)的比較40
• 3 結(jié)果40-51
• 3.1 最小抑菌濃度測(cè)定結(jié)果40-41
• 3.2 犬源大腸桿菌耐藥譜型分析41-42
• 3.3 犬源大腸桿菌耐藥基因PCR檢測(cè)42-49
• 3.4 犬源大腸桿菌耐藥基因型分析49
• 3.5 藥敏試驗(yàn)方法與耐藥基因PCR檢測(cè)方法的比較49-50
• 3.6 犬源大腸桿菌耐藥表型和耐藥基因的符合率比較50-51
• 4 討論51-52
• 5 小結(jié)52-54
• 第四章 犬源大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化組的研究54-62
• 1 材料54
• 1.1 菌株54
• 1.2 主要儀器和試劑54
• 2 方法54-56
• 2.1 犬源大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化組鑒定54-56
• 2.2 數(shù)據(jù)分析56
• 3 結(jié)果56-60
• 3.1 犬源大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化組分型PCR電泳檢測(cè)結(jié)果56-57
• 3.2 犬源大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化組分型57
• 3.3 犬源大腸桿菌不同系統(tǒng)進(jìn)化組別的毒力基因分布57-58
• 3.4 犬源腸桿菌不同系統(tǒng)進(jìn)化組別藥敏結(jié)果分析58-60
• 4 討論60
• 5 小結(jié)60-62
• 全文結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)62-63
• 1 全文結(jié)論62
• 2 全文創(chuàng)新點(diǎn)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文69-70
• 附錄70-73
• 致謝73-74

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