本文關(guān)鍵詞：番茄GST-L3基因遺傳轉(zhuǎn)化及ARF基因在青枯病發(fā)生過程中的表達(dá)分析

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【摘要】：青枯病是在番茄栽培過程中的一種主要病害,在我國南方濕熱多雨的季節(jié)發(fā)病非常嚴(yán)重,采用化學(xué)防治和生物防治效果不理想,抗病育種是防治青枯病最經(jīng)濟(jì)有效的方法,而抗病機(jī)理研究有助于制定抗病育種策略。本研究分為兩部分,一是在以前證明GST-L3參與番茄抗青枯病反應(yīng)的研究基礎(chǔ)上,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法驗(yàn)證該基因功能;其次,利用半定量技術(shù),分析番茄生長素響應(yīng)因子ARF在感、抗品種接種青枯菌后時空表達(dá)差異。論文的主要研究結(jié)果如下:1.在番茄離體再生體系中分化培養(yǎng)基的最佳激素組合是MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.8mg/L,生根培養(yǎng)基的最佳IAA濃度為0.5mg/L;在番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系中最佳預(yù)培養(yǎng)時間為2d,最佳共培養(yǎng)時間為2d,篩選抑制劑卡那霉素最佳濃度為50mg/L。2.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功地將GST-L3基因?qū)敫胁》阎?對轉(zhuǎn)基因植株接種鑒定結(jié)果表明:和野生型相比,轉(zhuǎn)基因番茄病害癥狀出現(xiàn)時間延緩,證明GST-L3參與了番茄的抗青枯病反應(yīng),主要參與前期的抗病反應(yīng)。3.利用外源噴施IAA的方法發(fā)現(xiàn)IAA在番茄抗青枯病反應(yīng)中具有負(fù)調(diào)控作用,增加了番茄的感病性;利用生物信息學(xué)的方法從番茄基因組中鑒別到22個ARF基因,利用RT-PCR技術(shù)分析了抗、感材料在接種青枯菌后ARF基因的表達(dá)情況。
【關(guān)鍵詞】：番茄 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因 遺傳轉(zhuǎn)化 生長素響應(yīng)因子
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S436.412.15
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-5
• 本文縮略詞及中英文對照5-8
• 1. 前言8-15
• 1.1 番茄青枯病8-10
• 1.1.1 番茄青枯病的概述8
• 1.1.2 番茄青枯病的發(fā)病癥狀8
• 1.1.3 番茄青枯菌的致病機(jī)理8-9
• 1.1.4 番茄對青枯病的抗性機(jī)制9-10
• 1.2 GSTs的研究進(jìn)展10-12
• 1.2.1 GSTs的分類10-11
• 1.2.2 GSTs的結(jié)構(gòu)11
• 1.2.3 GSTs的在植物中的作用11-12
• 1.3 生長素信號途徑與植物的抗病反應(yīng)12-14
• 1.3.1 生長素在植物抗病反應(yīng)中的作用12-13
• 1.3.2 生長素響應(yīng)因子ARF的作用機(jī)制13-14
• 1.4 本研究的目的及意義14-15
• 2 材料與方法15-25
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 試驗(yàn)材料15
• 2.1.2 主要的藥品、試劑及試劑盒15
• 2.1.3 主要培養(yǎng)基及試劑的配制15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-25
• 2.2.1 番茄再生體系的優(yōu)化16-17
• 2.2.2 番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化17
• 2.2.3 感病材料‘M82’的遺傳轉(zhuǎn)化17-18
• 2.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的PCR鑒定18-19
• 2.2.5 T_1學(xué)轉(zhuǎn)基因植株的抗性鑒定19-20
• 2.2.6 外源生長素處理對番茄青枯病抗性的影響20
• 2.2.7 生長素響應(yīng)因子ARF家族鑒定20
• 2.2.8 番茄抗、感材料接種青枯菌后ARF的表達(dá)分析20-25
• 3 結(jié)果與分析25-39
• 3.1 番茄再生體系的優(yōu)化25-27
• 3.1.1 不同的激素配比對番茄子葉分化的影響25-26
• 3.1.2 IAA濃度對番茄外植體生根的影響26-27
• 3.2 番茄轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化27-28
• 3.2.1 預(yù)培養(yǎng)時間對遺傳轉(zhuǎn)化的影響27
• 3.2.2 農(nóng)桿菌與番茄子葉共培養(yǎng)時間對遺傳轉(zhuǎn)化的影響27
• 3.2.3 卡那霉素濃度對番茄子葉轉(zhuǎn)化的影響27-28
• 3.3 轉(zhuǎn)基因植株的獲得和PCR鑒定28-30
• 3.4 T_1學(xué)轉(zhuǎn)基因植株的青枯病抗性鑒定30
• 3.5 外源IAA對番茄抗青枯病的影響30-31
• 3.6 番茄總RNA質(zhì)量分析31
• 3.7 生長素響應(yīng)因子（ARF）氨基酸序列鑒定和生物信息學(xué)分析31-35
• 3.7.1 ARF理化性質(zhì)分析表31-32
• 3.7.2 ARF保守結(jié)構(gòu)域分析及聚類分析32-35
• 3.8 ARF基因的半定量分析35-39
• 4 討論39-42
• 4.1 影響遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素討論39-40
• 4.2 轉(zhuǎn)GST-L3基因番茄對青枯病的抗性40
• 4.3 生長素及生長素響應(yīng)因子在抗病中的作用40-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬立功;孟慶林;張勻華;劉志華;王志英;;向日葵谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及抗病功能研究[J];中國油料作物學(xué)報;2015年05期

2 李倩;王濱;李培環(huán);王富;董曉穎;段艷欣;;番茄子葉和下胚軸離體再生體系的建立[J];北方園藝;2015年01期

3 汪國平;褚夢;孔杰;陳馥瑩;陳煜;趙亞華;;番茄青枯病抗性兩個相關(guān)基因功能的初步鑒定[J];園藝學(xué)報;2014年06期

4 賀璽強(qiáng);徐恒戩;趙汝鳳;;番茄遺傳轉(zhuǎn)化影響因素及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];北方園藝;2013年20期

5 陳秀華;王臻昱;李先平;朱延明;劉麗;陳威;陳勤;;谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的研究進(jìn)展[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2013年01期

6 方佳;何勇清;余敏芬;鄭炳松;;植物生長素響應(yīng)因子基因的研究進(jìn)展[J];浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報;2012年04期

7 裴冬麗;;谷胱甘肽還原酶在植物防御中的研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2012年18期

8 黃真池;劉媛;曾富華;盧向陽;;青枯菌致病機(jī)理及作物抗青枯病研究進(jìn)展[J];熱帶亞熱帶植物學(xué)報;2008年05期

9 高媛媛;余文貴;趙統(tǒng)敏;張保龍;倪萬潮;何曉蘭;姚姝;;抗菌肽Cecropin B基因?qū)敕烟岣咔嗫莶】剐訹J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報;2007年06期

10 李曉東,劉敬梅,陳杭,程智慧,柴敏;甜蛋白基因MBLII對番茄的遺傳轉(zhuǎn)化[J];西北植物學(xué)報;2004年05期

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本文編號：648706