本文關(guān)鍵詞：茯苓細(xì)胞色素P450還原酶基因的克隆與生物信息學(xué)分析

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【摘要】：目的從茯苓Poria cocos中克隆出細(xì)胞色素P450還原酶(CPR)基因,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。方法利用茯苓轉(zhuǎn)錄組注釋信息,通過(guò)RACE擴(kuò)增得到茯苓CPR基因(Pc CPR)全長(zhǎng),并PCR得到對(duì)應(yīng)基因組DNA序列。通過(guò)生物信息學(xué)方法,對(duì)該基因編碼蛋白的特征進(jìn)行分析,I-TASSER模擬出蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu),MEGA構(gòu)建蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果獲得含有完整開(kāi)放閱讀框(ORF)的c DNA全長(zhǎng)2 514 bp(Gen Bank號(hào)為KP768251),Pc CPR的基因組DNA 5 292bp(Gen Bank號(hào)為KP896487),含4個(gè)外顯子、3個(gè)內(nèi)含子�；蚓幋a732個(gè)氨基酸的蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量81 147,等電點(diǎn)(p I)為5.39,為不穩(wěn)定性親水蛋白,非分泌蛋白,且不具有信號(hào)識(shí)別功能。蛋白定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,第7~22位氨基酸為跨膜區(qū);具有2個(gè)黃素結(jié)合的保守結(jié)構(gòu)域,FAD、NADP的結(jié)合位點(diǎn)各自在蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)空間上相鄰近。同源性分析顯示,Pc CPR與擔(dān)子菌CPR的相似性明顯高于子囊菌CPR。結(jié)論成功從茯苓中克隆得到Pc CPR基因,為進(jìn)一步研究Pc CPR及相關(guān)代謝提供基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用植物研究所;
【關(guān)鍵詞】： 茯苓 細(xì)胞色素P還原酶 基因克隆 生物信息學(xué)分析 RACE
【基金】：國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI06B03)
【分類(lèi)號(hào)】：S567.32
【正文快照】： 細(xì)胞色素P450還原酶(EC 1.6.2.4,cytochromeP450 reductase,簡(jiǎn)稱(chēng)CPR或POR)是一種在許多代謝進(jìn)程中必需的酶,主要參與細(xì)胞色素P450氧化酶系(cytochrome P450 oxidoreductase system,P450s)催化的初級(jí)及次級(jí)代謝反應(yīng),如萜類(lèi)物質(zhì)代謝、藥物代謝、外源化合物代謝等[1-2]。在此氧化

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