本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對人白細胞介素-1受體相關(guān)激酶-M基因表達的抑制作用及其機制

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【摘要】：目的探討白藜蘆醇對人白細胞介素-1受體相關(guān)激酶-M(IRAK-M)基因表達的抑制作用及其分子機制。方法用不同濃度的白藜蘆醇分別作用于轉(zhuǎn)染神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調(diào)控樣蛋白4(Nedd4L)-HA或IRAK-M-Flag質(zhì)粒的Hela細胞和人單核細胞株THP1細胞,處理20 h后采用Western印跡法檢測其Nedd4L和IRAK-M的表達。在A549和Hela細胞中分別共轉(zhuǎn)染IRAK-M-Flag和不同濃度的Nedd4L-HA表達質(zhì)粒,36 h后采用Western印跡法檢測IRAK-M和Nedd4L的表達。用IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表達質(zhì)粒分別單獨轉(zhuǎn)染、共同轉(zhuǎn)染至Hela細胞,36 h后用細胞裂解液處理細胞,采用免疫共沉淀法檢測IRAK-M與Nedd4L的相互作用。在A549細胞中分別共轉(zhuǎn)染IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表達質(zhì)粒,36 h后采用免疫熒光法檢測IRAK-M和Nedd4L的共定位情況。結(jié)果 Hela細胞中分別轉(zhuǎn)染2μg外源Nedd4L-HA或IRAK-M-Flag質(zhì)粒24 h后,0、10、20μmol/L白藜蘆醇處理20 h,Western印跡法檢測結(jié)果顯示,10、20μmol/L白藜蘆醇處理組的Nedd4L-HA蛋白質(zhì)相對表達量均顯著高于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.01),而10、20μmol/L白藜蘆醇處理組IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對表達量均顯著低于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.05),且20μmol/L白藜蘆醇處理組顯著低于10μmol/L白藜蘆醇處理組(P0.01)。0、10、20μmol/L白藜蘆醇處理THP1細胞20 h,Western印跡法檢測結(jié)果顯示,10、20μmol/L白藜蘆醇處理組的Nedd4L蛋白質(zhì)相對表達量均顯著高于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.01),而IRAK-M蛋白質(zhì)相對表達量均顯著低于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.05)。在A549和Hela細胞中分別轉(zhuǎn)染1μg的IRAK-M-Flag和不同質(zhì)量(0、0.5、1μg)的Nedd4L-HA表達質(zhì)粒,Western印跡法結(jié)果顯示,在A549細胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組的IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對表達量均顯著低于0μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組(P值均0.01);在Hela細胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組的IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對表達量均顯著低于0μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組(P值均0.01)。用IRAK-M-Flag、Nedd4L-HA表達質(zhì)粒分別單獨轉(zhuǎn)染、共同轉(zhuǎn)染至Hela細胞中,免疫共沉淀檢測結(jié)果顯示,在共表達IRAK-M和Nedd4L的細胞裂解物中,用抗Flag的抗體能將Nedd4L-HA沉淀下來,用抗HA的抗體同樣能將IRAK-M-Flag沉淀下來。將表達質(zhì)粒IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA共同轉(zhuǎn)染至A549細胞中,36 h后免疫熒光檢測結(jié)果顯示,在共轉(zhuǎn)染的細胞中,可觀察到綠色熒光和紅色熒光以重疊形式分布于細胞膜和細胞質(zhì)中。結(jié)論白藜蘆醇可抑制IRAK-M蛋白的表達,其作用機制可能與Nedd4L蛋白的表達上調(diào)有關(guān)。
【作者單位】： 上海長海醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： 白藜蘆醇 白細胞介素-受體相關(guān)激酶-M 神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調(diào)控樣蛋白 分子機制
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81671939) 上海市科學(xué)技術(shù)委員會醫(yī)學(xué)引導(dǎo)項目(15411963200)資助
【分類號】：R285
【正文快照】： 白藜蘆醇普遍存在于葡萄科、百合科、豆科等多種植物中,是一種天然的植物抗體,具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗衰老和免疫調(diào)節(jié)等多種重要的藥理作用[1-2],但其發(fā)揮作用的具體機制目前仍不明確。人IL-1受體相關(guān)激酶-M(interleukin-1 receptor-associated kinase-M,IRAK-M)，

本文編號：647708