本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)人白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶-M基因表達(dá)的抑制作用及其機(jī)制

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【摘要】：目的探討白藜蘆醇對(duì)人白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶-M(IRAK-M)基因表達(dá)的抑制作用及其分子機(jī)制。方法用不同濃度的白藜蘆醇分別作用于轉(zhuǎn)染神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)發(fā)育調(diào)控樣蛋白4(Nedd4L)-HA或IRAK-M-Flag質(zhì)粒的Hela細(xì)胞和人單核細(xì)胞株THP1細(xì)胞,處理20 h后采用Western印跡法檢測(cè)其N(xiāo)edd4L和IRAK-M的表達(dá)。在A549和Hela細(xì)胞中分別共轉(zhuǎn)染IRAK-M-Flag和不同濃度的Nedd4L-HA表達(dá)質(zhì)粒,36 h后采用Western印跡法檢測(cè)IRAK-M和Nedd4L的表達(dá)。用IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表達(dá)質(zhì)粒分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染、共同轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞,36 h后用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞,采用免疫共沉淀法檢測(cè)IRAK-M與Nedd4L的相互作用。在A549細(xì)胞中分別共轉(zhuǎn)染IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA表達(dá)質(zhì)粒,36 h后采用免疫熒光法檢測(cè)IRAK-M和Nedd4L的共定位情況。結(jié)果 Hela細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染2μg外源Nedd4L-HA或IRAK-M-Flag質(zhì)粒24 h后,0、10、20μmol/L白藜蘆醇處理20 h,Western印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,10、20μmol/L白藜蘆醇處理組的Nedd4L-HA蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著高于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.01),而10、20μmol/L白藜蘆醇處理組IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著低于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.05),且20μmol/L白藜蘆醇處理組顯著低于10μmol/L白藜蘆醇處理組(P0.01)。0、10、20μmol/L白藜蘆醇處理THP1細(xì)胞20 h,Western印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,10、20μmol/L白藜蘆醇處理組的Nedd4L蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著高于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.01),而IRAK-M蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著低于0μmol/L白藜蘆醇處理組(P值均0.05)。在A549和Hela細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染1μg的IRAK-M-Flag和不同質(zhì)量(0、0.5、1μg)的Nedd4L-HA表達(dá)質(zhì)粒,Western印跡法結(jié)果顯示,在A549細(xì)胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組的IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著低于0μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組(P值均0.01);在Hela細(xì)胞中,0.5、1μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組的IRAK-M-Flag蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量均顯著低于0μg Nedd4L-HA轉(zhuǎn)染組(P值均0.01)。用IRAK-M-Flag、Nedd4L-HA表達(dá)質(zhì)粒分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染、共同轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞中,免疫共沉淀檢測(cè)結(jié)果顯示,在共表達(dá)IRAK-M和Nedd4L的細(xì)胞裂解物中,用抗Flag的抗體能將Nedd4L-HA沉淀下來(lái),用抗HA的抗體同樣能將IRAK-M-Flag沉淀下來(lái)。將表達(dá)質(zhì)粒IRAK-M-Flag和Nedd4L-HA共同轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞中,36 h后免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,在共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中,可觀察到綠色熒光和紅色熒光以重疊形式分布于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)論白藜蘆醇可抑制IRAK-M蛋白的表達(dá),其作用機(jī)制可能與Nedd4L蛋白的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
【作者單位】： 上海長(zhǎng)海醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： 白藜蘆醇 白細(xì)胞介素-受體相關(guān)激酶-M 神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)發(fā)育調(diào)控樣蛋白 分子機(jī)制
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81671939) 上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)醫(yī)學(xué)引導(dǎo)項(xiàng)目(15411963200)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R285
【正文快照】： 白藜蘆醇普遍存在于葡萄科、百合科、豆科等多種植物中,是一種天然的植物抗體,具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗衰老和免疫調(diào)節(jié)等多種重要的藥理作用[1-2],但其發(fā)揮作用的具體機(jī)制目前仍不明確。人IL-1受體相關(guān)激酶-M(interleukin-1 receptor-associated kinase-M,IRAK-M)，

本文編號(hào)：647708