本文關(guān)鍵詞：FoxM1基因表達(dá)沉默對T24細(xì)胞EMT的影響

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【摘要】：目的:選擇膀胱癌T24細(xì)胞系為研究對象,觀察T24細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子FoxM1基因表達(dá)沉默,對T24細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影響,初步探討膀胱癌細(xì)胞EMT的發(fā)生機制。方法:構(gòu)建FoxM1干擾質(zhì)粒FoxM1-shRNA,通過脂質(zhì)體lipofectamine2000介導(dǎo),將FoxM1-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入T24細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48h后,采用RT-PCR及Western-blot方法,分別檢測FoxM1mRNA、蛋白的表達(dá)情況,選擇干擾效果最強組進(jìn)行正式實驗。將FoxM1-shRNA和NC-shRNA分別轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞,建立shRNA-FoxM1-T24及shRNA-NC-T24細(xì)胞系,以shRNA-FoxM1-T24為實驗組,shRNA-NC-T24及未轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞為對照組。轉(zhuǎn)染48小時后,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,RT-PCR及Western-blot從mRNA與蛋白質(zhì)水平檢測三組細(xì)胞FoxM1、E-cadherin及Vimentin的表達(dá),并觀察FoxM1基因表達(dá)降低對T24細(xì)胞EMT的影響。結(jié)果:1.RT-PCR和Western-blot結(jié)果顯示,四組分別轉(zhuǎn)染Fox M1干擾載體shRNA1、sh RNA2、shRNA3、shRNA4的T24細(xì)胞相對于空白及陰性對照組,FoxM1mRNA、蛋白的表達(dá)顯著減少(P0.01),其中FoxM1-shRNA3的干擾效果最強,選其進(jìn)一步實驗。2.FoxM1mRNA、蛋白表達(dá)在FoxM1-shRNA3轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞48小時后顯著減少,與空白及陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),提示T24細(xì)胞Fox M1基因表達(dá)沉默。高倍顯微鏡下,空白及陰性對照組細(xì)胞多呈現(xiàn)多角形,細(xì)胞孤立,間隙較大,表現(xiàn)為間質(zhì)表型細(xì)胞,而FoxM1-shRNA3轉(zhuǎn)染組細(xì)胞多呈現(xiàn)橢圓形,細(xì)胞聚集,間隙縮小,表現(xiàn)為上皮表型細(xì)胞。3.FoxM1-shRNA3轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞48h后,間質(zhì)標(biāo)記物Vimentin表達(dá)明顯減少,而上皮標(biāo)記物E-cadherin表達(dá)顯著增加,與空白及陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),提示FoxM1基因表達(dá)沉默后,T24細(xì)胞由間質(zhì)表型細(xì)胞向正常上皮表型細(xì)胞轉(zhuǎn)化。結(jié)論:FoxM1可能是調(diào)控T24細(xì)胞EMT的轉(zhuǎn)錄因子;FoxM1基因表達(dá)沉默,可抑制T24細(xì)胞EMT的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌T24細(xì)胞 FoxM1轉(zhuǎn)錄因子 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 實驗材料及方法13-29
• 2.1 實驗材料13-17
• 2.2 實驗方法17-29
• 第3章 實驗結(jié)果29-37
• 第4章 實驗討論37-41
• 第5章 實驗結(jié)論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 綜述 FoxM1在泌尿系腫瘤中的研究進(jìn)展51-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 碩士期間發(fā)表論文情況61-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：611050