本文關(guān)鍵詞：新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆與表達(dá)及功能初步分析

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【摘要】：新疆野扁桃(Amygdalus Ledebouriana Schlech)又稱野巴旦杏,是薔薇科李亞科桃屬扁桃亞屬的落葉灌木,是第三紀(jì)中新世的孑遺落葉樹種,有植物界“活化石”之稱。由于野扁桃林遭受病蟲害,以及人為的破壞,所以加強(qiáng)其研究和科學(xué)保護(hù)顯得十分重要。本研究分別采集新疆境內(nèi)裕民,塔城,托里,布爾津,哈巴河共5個居群的單株,總計(jì)150份材料,利用同源克隆技術(shù),從中選擇一個基因型的野扁桃自交不親和相關(guān)基因SSK1進(jìn)行克隆,并通過生物信息學(xué)軟件對克隆得到的基因進(jìn)行分析,然后通過構(gòu)建矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化體系,對野扁桃自交不親和基因SSK1進(jìn)行功能驗(yàn)證;以期本研究能為野扁桃的保護(hù),以及為今后研究其自交不親和機(jī)理提供一個參考。主要研究結(jié)果如下:1.本試驗(yàn)以新疆野扁桃植物葉片及花粉為試驗(yàn)材料采用Rt-PCR以及生物測序等技術(shù),克隆得到了一個新的SSK1基因全長cDNA,將之命名為PetSSK1(NCBI收錄號為:KT984123)。PetSSK1全長為602 bp,開放閱讀框?yàn)?34 bp,共編碼了177個氨基酸,經(jīng)生物信息學(xué)分析,PetSSK1蛋白的分子式為C910H1421N233O295S6,相對分子質(zhì)量為20 538.0,理論推導(dǎo)半衰期為30 h,等電點(diǎn)為4.52,不穩(wěn)定指數(shù)為41.48,平均疏水指數(shù)為-0.567,PetSSK1蛋白屬于水溶性不穩(wěn)定蛋白。首次從新疆野扁桃植株中克隆得到了SSK1基因全長。2.通過對矮牽牛再生體系的建立以及優(yōu)化,得到矮牽牛最適宜的種子滅菌方法是:75%酒精處理30s,0.1%升汞處理6min,矮牽牛最適宜的誘導(dǎo)不定芽生長的培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,最適宜的生根培養(yǎng)基為?MS+0.4 mg/L IBA,最終通過煉苗,定植得到生長良好的矮牽牛幼苗。3.構(gòu)建野扁桃自交不親和性相關(guān)基因PetSSK1的植物表達(dá)載體pCAMBIA1303-PetSSK1,采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將該基因?qū)氚珷颗?并研究了不同種類及濃度抗生素對矮牽牛再生的影響。結(jié)果表明:成功獲得轉(zhuǎn)化新疆野扁桃自交不親和相關(guān)基因PetSSK1的矮牽牛植株,并篩選出矮牽牛的卡那霉素(Kan)和頭孢霉素(Cef)的敏感濃度分別為25 mg/L、300 mg/L,并進(jìn)一步通過PCR分子檢測確認(rèn)其為轉(zhuǎn)基因陽性植株。
【關(guān)鍵詞】：野扁桃 自交不親和 PetSSK1基因 矮牽牛 轉(zhuǎn)基因
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S662.9
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 緒論8-20
• 1.1 野扁桃概述8-9
• 1.2 植物自交不親和研究進(jìn)展9-13
• 1.3 自交不親和的作用機(jī)理13-15
• 1.4 SCF復(fù)合體降解模型15-17
• 1.5 薔薇科自交不親和性研究現(xiàn)狀17-19
• 1.6 本研究的目的意義19-20
• 第2章 新疆野扁桃自交不親和基因Pet SSK1的克隆及生物信息學(xué)分析20-33
• 2.1 材料和方法20-23
• 2.2 結(jié)果與分析23-32
• 2.3 討論32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 第3章 矮牽牛再生體系的建立及優(yōu)化33-39
• 3.1 試驗(yàn)材料與試驗(yàn)方法33-34
• 3.2 試驗(yàn)方法34-36
• 3.3 結(jié)果與分析36-38
• 3.4 討論38
• 3.5 小結(jié)38-39
• 第4章 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)矮牽牛新疆野扁桃Pet SSK1基因遺傳轉(zhuǎn)化體系建立39-50
• 4.1 試驗(yàn)材料與試驗(yàn)方法39-45
• 4.2 結(jié)果與分析45-48
• 4.3 討論48-49
• 4.4 小結(jié)49-50
• 第5章 結(jié)論與展望50-51
• 5.1 結(jié)論50
• 5.2 后期工作50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄57-60
• 致謝60-61
• 作者簡介61

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 夏江宏;新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆與表達(dá)及功能初步分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號：595121