本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)FRT-LacZ基因的MDCK細(xì)胞株構(gòu)建

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【摘要】：[目的]通過慢病毒載體系統(tǒng)獲得穩(wěn)定表達(dá)FRT-LacZ基因的MDCK細(xì)胞株。[方法]PCR擴(kuò)增FRT-LacZ基因,亞克隆至慢病毒載體p LVX-PGK-Puro。經(jīng)四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞包裝重組慢病毒并檢測病毒滴度,獲得的慢病毒感染MDCK細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選和β-半乳糖苷酶原位染色檢測篩選鑒定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株。[結(jié)果]測序證實(shí),成功構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒p LVX-FRT-LacZ-PGK-Puro。包裝產(chǎn)生的慢病毒滴度為4.04×107TU/m L,重組慢病毒感染MDCK細(xì)胞后篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)FRT-LacZ基因的MDCK細(xì)胞株。[結(jié)論]構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)FRTLacZ基因的MDCK細(xì)胞株。
【作者單位】： 西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院;西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院;甘肅省動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： FRT-LacZ基因 慢病毒載體 MDCK細(xì)胞 位點(diǎn)特異性重組
【基金】：教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(“動(dòng)物醫(yī)學(xué)生物工程創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)”,No.IRT13091) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“脂聯(lián)素介導(dǎo)綿羊肌內(nèi)、內(nèi)臟和皮下脂肪細(xì)胞生脂的基因表達(dá)模式與分子調(diào)控”,No.31260533) 甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“綿羊脂聯(lián)素及其受體基因表達(dá)模式研究”,No.1208RJZA188) 甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(“CHO基因工程細(xì)胞株構(gòu)建及其生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)研究”,No.1204FKCA182) 校企合作項(xiàng)目(“應(yīng)用基因工程技術(shù)構(gòu)建MDCK懸浮細(xì)胞應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)”,No.h2011-19) 西北民族大學(xué)研究生科研(實(shí)踐)創(chuàng)新項(xiàng)目(“新型γ-PGA高效工程菌株構(gòu)建”,No.Yxm2014188)資助
【分類號】：Q78
【正文快照】： 利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)外源基因生產(chǎn)藥用蛋白、單克隆抗體和疫苗是生物制藥工業(yè)的主要發(fā)展方向,但哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)水平較低、獲得高表達(dá)工程細(xì)胞株所需時(shí)間長、細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)成本高等因素導(dǎo)致哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白類藥物的成本較高。因此,建立哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)體系包括

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 袁婷;慢病毒載體介導(dǎo)的RNAi靶向沉默HSP70基因?qū)α馨土黾?xì)胞凋亡的影響[D];山東大學(xué);2011年

2 孫國鋒;慢病毒介導(dǎo)eGFP轉(zhuǎn)基因雞的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許辰煜,程通,盧五迅,陳敏,吳婷,王穎彬,張軍,夏寧邵;桿狀病毒對不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移及表達(dá)效率的研究[J];生物工程學(xué)報(bào);2004年01期

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本文編號：595759