apoE修飾陽離子脂質(zhì)體介導HSV-tk基因?qū)Ω伟┘毎臍饔醚芯?/H1>
發(fā)布時間：2017-07-17 14:03
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更多相關(guān)文章： 肝細胞癌 apo E脂質(zhì)體 survivin啟動子 HSVtk基因
【摘要】：目的:1.檢測本實驗室合成的基因載體apo E修飾脂質(zhì)體(apo E-lipoplex)對肝(癌)細胞的結(jié)合特異性。2.構(gòu)建包含自殺基因HSVtk的質(zhì)粒pSurvivin-TK-PBI-CMV2,用apo E-lipoplex轉(zhuǎn)染其進入肝(癌)細胞,檢測HSVtk基因在細胞中的表達情況。3.檢測apo E-lipoplex/HSVtk/GCV系統(tǒng)對肝癌細胞的靶向殺傷作用。方法:1.用apoE-lipoplex攜帶pGenesil-1質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細胞HepG2、Huh-7和正常肝細胞HL-7702,宮頸癌細胞Hela,流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染率。2.用apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細胞HepG2、Huh-7和肝細胞HL-7702,RT-PCR檢測HSVtk基因的mRNA表達水平,western blot檢測HSVtk蛋白表達。3.apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞HepG2、Huh-7和肝細胞HL-7702,加入前體藥物更昔洛韋(GCV)。2 d后流式細胞儀檢測細胞凋亡率;MTT法檢測細胞增殖;Hoechst染色后熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。結(jié)果:1.apo E-lipoplex對肝癌細胞HepG2、Huh-7和肝細胞HL-7702的轉(zhuǎn)染率相比宮頸癌細胞Hela更高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞HepG2、Huh-7和肝細胞HL-7702后,HSVtk基因的mRNA和蛋白在兩種肝癌細胞中均有明顯表達,但在肝細胞HL-7702中均未檢測到表達。3.流式結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染組肝癌細胞HepG2、Huh-7凋亡顯著(P0.05);MTT結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染組肝癌細胞HepG2、Huh-7增殖減弱顯著(P0.05);熒光顯微鏡下觀察,轉(zhuǎn)染組肝癌細胞有凋亡的特征性形態(tài)學改變。結(jié)論:1.apo E-lipoplex對肝(癌)細胞具有較高的轉(zhuǎn)染率,有靶向性轉(zhuǎn)染肝(癌)細胞的能力。2.相比肝細胞HL-7702,apo E-lipoplex介導的survivin啟動子驅(qū)動的HSVtk基因在肝癌細胞HepG2、Huh-7中有特異性表達。3.apo E-lipoplex介導的pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒+GCV系統(tǒng),對肝癌細胞HepG2、Huh-7有選擇性殺傷作用,而對肝細胞HL-7702未見明顯殺傷作用。本課題為國家自然科學基金“乳糜微粒定向介導TK基因載體系統(tǒng)對肝癌殺傷作用(編號:81172136)”。
【關(guān)鍵詞】：肝細胞癌 apo E脂質(zhì)體 survivin啟動子 HSVtk基因
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】： - 摘要6-8
- abstract8-10
- 中英文縮略詞對照表10-12
- 前言12-14
- 1 實驗材料和儀器14-21
- 1.1 細胞株14
- 1.2 菌株及質(zhì)粒14
- 1.3 主要試劑14-16
- 1.4 實驗器材16-17
- 1.5 試劑配制17-21
- 2 實驗方法21-33
- 2.1 質(zhì)粒準備21-24
- 2.2 包裹及穩(wěn)定性實驗24-25
- 2.3 細胞培養(yǎng)25-26
- 2.4 細胞轉(zhuǎn)染率測定26
- 2.5 轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)HSV-tk基因檢測26-28
- 2.6 轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)HSV-tk蛋白檢測28-30
- 2.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡情況30-31
- 2.8 Hoechst染色檢測細胞形態(tài)變化31-32
- 2.9 MTT檢測細胞增殖32
- 2.10 統(tǒng)計學分析32-33
- 3 實驗結(jié)果33-47
- 3.1 質(zhì)粒驗證實驗33-35
- 3.2 脂質(zhì)體檢測實驗35-36
- 3.3 細胞實驗36-47
- 4 討論47-49
- 5 結(jié)論49-50
- 參考文獻50-53
- 綜述53-66
- 參考文獻60-66
- 致謝66-67
- 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果67-68
- 個人簡歷68
【相似文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 謝文練,梁正東,呂凌;HSV-TK基因逆轉(zhuǎn)錄病毒重組體的構(gòu)建和鑒定[J];中山醫(yī)科大學學報;1997年04期
2 鞠佃文;抗病毒藥物選擇性增強照射對于HSV-tk基因轉(zhuǎn)染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的殺傷作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;1995年02期
3 王茜;杜珍武;趙虹;張桂珍;;四環(huán)素基因表達調(diào)控系統(tǒng)調(diào)控HSV-tk基因表達的單載體構(gòu)建[J];中國老年學雜志;2009年07期
4 耿雨紅,孟德鳴,吳昊泉,徐人爾,劉全海,李昌本;帶HSV-tk基因的重組腺病毒治療腫瘤的初步研究[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1998年09期
5 李凡,陳立,黃紅蘭,易世紅,趙春燕,魏強;腺病毒載體介導的HSV-tk基因殺傷腫瘤細胞的研究[J];中國生物制品學雜志;2001年01期
6 伍志堅;HSV-tk基因在基因治療中的應用研究進展[J];生物技術(shù)通訊;1995年04期
7 田澤君,葉丹,汪家瑞;HSV-tk基因?qū)嶒炐匝艹尚涡g(shù)后再狹窄的抑制作用[J];首都醫(yī)科大學學報;1999年02期
8 劉為池,葉鋼,張榮貴;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導HSV-TK基因治療膀胱癌及旁觀者效應的觀察[J];重慶醫(yī)學;2003年02期
9 張東青;HSV-TK基因治療在前列腺癌中的研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2002年02期
10 劉為池,葉鋼,張榮貴;HSV-TK基因在膀胱癌小鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移和丙氧鳥苷治療效果[J];第一軍醫(yī)大學學報;2002年01期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 李凡;魏強;趙春燕;陳立;;腺病毒載體介導的HSV-tk基因殺傷腫瘤細胞的研究[A];新世紀 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年
中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 謝文練;逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導HSV-TK基因治療膀胱癌的實驗研究[D];中山醫(yī)科大學;1996年
中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條
1 張英敏;apoE修飾陽離子脂質(zhì)體介導HSV-tk基因?qū)Ω伟┘毎臍饔醚芯縖D];山西醫(yī)科大學;2016年
2 李杰;HSV-tk基因真核表達載體的構(gòu)建及其在食管癌細胞株中的表達[D];鄭州大學;2004年
3 謝輝;HIFU聯(lián)合載HSV-TK基因的超聲分子探針治療對裸鼠肝移植瘤血管生成的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2014年
4 鄭志濤;腺病毒介導的HSV-tk基因聯(lián)合GCV治療人膀胱癌SCaBER的實驗研究[D];蘇州大學;2003年
，
本文編號：553902
本文鏈接：http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/553902.html
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【關(guān)鍵詞】：肝細胞癌 apo E脂質(zhì)體 survivin啟動子 HSVtk基因
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：
- 摘要6-8
- abstract8-10
- 中英文縮略詞對照表10-12
- 前言12-14
- 1 實驗材料和儀器14-21
- 1.1 細胞株14
- 1.2 菌株及質(zhì)粒14
- 1.3 主要試劑14-16
- 1.4 實驗器材16-17
- 1.5 試劑配制17-21
- 2 實驗方法21-33
- 2.1 質(zhì)粒準備21-24
- 2.2 包裹及穩(wěn)定性實驗24-25
- 2.3 細胞培養(yǎng)25-26
- 2.4 細胞轉(zhuǎn)染率測定26
- 2.5 轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)HSV-tk基因檢測26-28
- 2.6 轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)HSV-tk蛋白檢測28-30
- 2.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡情況30-31
- 2.8 Hoechst染色檢測細胞形態(tài)變化31-32
- 2.9 MTT檢測細胞增殖32
- 2.10 統(tǒng)計學分析32-33
- 3 實驗結(jié)果33-47
- 3.1 質(zhì)粒驗證實驗33-35
- 3.2 脂質(zhì)體檢測實驗35-36
- 3.3 細胞實驗36-47
- 4 討論47-49
- 5 結(jié)論49-50
- 參考文獻50-53
- 綜述53-66
- 參考文獻60-66
- 致謝66-67
- 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果67-68
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2 鞠佃文;抗病毒藥物選擇性增強照射對于HSV-tk基因轉(zhuǎn)染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的殺傷作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;1995年02期
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1 李凡;魏強;趙春燕;陳立;;腺病毒載體介導的HSV-tk基因殺傷腫瘤細胞的研究[A];新世紀 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年
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1 謝文練;逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導HSV-TK基因治療膀胱癌的實驗研究[D];中山醫(yī)科大學;1996年
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4 鄭志濤;腺病毒介導的HSV-tk基因聯(lián)合GCV治療人膀胱癌SCaBER的實驗研究[D];蘇州大學;2003年
，本文編號：553902
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