本文關(guān)鍵詞：表面展示棉鈴蟲鈣粘蛋白基因細胞系的建立

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【摘要】：為研究蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)殺蟲晶體蛋白與其受體鈣粘蛋白的相互作用,本研究利用苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)囊膜蛋白GP64細胞膜錨定的特點,將172 bp的N端信號肽(GP64 signal peptide,gp64sp)和135 bp的C端膜錨定區(qū)域(GP64 C-terminal transmembrane domain,gp64ctd)連接,并在中間添加了一段含有6個酶切位點的序列,再連接到表達載體p IZ/V5-His,成功構(gòu)建了一個使外源基因在細胞膜上表達的重組載體p IZ/V5-gp64。將擴增的3 882 bp的棉鈴蟲鈣粘蛋白(Helicoverpa armigera cadherin,HaCAD)基因重復(fù)區(qū)和近膜區(qū)片段與重組載體p IZ/V5-gp64進行酶切和連接,構(gòu)建重組載體p IZ/V5-gp64-HaCAD,將其轉(zhuǎn)染棉鈴蟲細胞系Ha-E-1,通過篩選、細胞克隆和PCR驗證,獲得了重組鈣粘蛋白基因的轉(zhuǎn)基因細胞系Ha-T-CAD。免疫熒光法檢測證實,鈣粘蛋白在轉(zhuǎn)基因細胞系Ha-T-CAD中成功表達。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),在Ha-T-CAD細胞的膜蛋白中有140 k D大小的鈣粘蛋白。轉(zhuǎn)基因細胞系Ha-T-CAD的構(gòu)建將為Bt殺蟲晶體蛋白作用機理以及昆蟲對Bt毒素的抗性機制研究提供基礎(chǔ)資料。
【作者單位】： 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與植物保護學(xué)院/山東省植物病蟲害綜合防控重點實驗室;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所/植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 鈣粘蛋白 棉鈴蟲 轉(zhuǎn)基因細胞系 GP蛋白 蛋白表達
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31272376) 植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室開放基金(No.SKLOF201315) 山東省“泰山學(xué)者”建設(shè)工程專項
【分類號】：S433
【正文快照】： 蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可產(chǎn)生具有殺蟲活性的晶體蛋白(或晶體毒素),這些蛋白常被作為生物殺蟲劑直接施用或在轉(zhuǎn)基因作物中表達而廣泛應(yīng)用(Bravo et al.,2011;Sanahujaet al.,2011)。我國自20世紀(jì)90年代廣泛種植轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉(Gossypium hirsutum)后,較好

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本文編號：522110