本文關(guān)鍵詞：PLIN1基因沉默對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂解的影響及機(jī)制探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用RNA干擾技術(shù)沉默3T3-L1脂肪細(xì)胞中圍脂滴蛋白(PLIN1)基因的表達(dá),觀察對(duì)細(xì)胞中脂解的影響,并進(jìn)行分子機(jī)制探討,為肥胖癥相關(guān)生物制劑的篩選與制備提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.采用基因重組技術(shù)構(gòu)建3組陽(yáng)性sh-PLIN1干擾載體以及1組陰性載體,并通過(guò)菌液PCR法和DNA測(cè)序法對(duì)其進(jìn)行鑒定。2.3T3-L1前脂肪細(xì)胞采用“雞尾酒”法誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)成功后脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染細(xì)胞2d。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功后,采用Bodipy 493/503染色脂滴,Hoechest 33258襯染細(xì)胞核;采用酶法檢測(cè)細(xì)胞中甘油三酯(TG)及甘油的含量,評(píng)價(jià)細(xì)胞脂解情況。4.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞通過(guò)Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中圍脂滴蛋白A(PLIN1A)、甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)及其磷酸化蛋白(p-HSL)的表達(dá);通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞中環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)的濃度。另外,異丙腎上腺素(ISO)與sh-PLIN1干擾載體聯(lián)合干預(yù)時(shí),以濃度為10μM的ISO干預(yù)細(xì)胞6h。結(jié)果:1.隨著細(xì)胞誘導(dǎo)分化的進(jìn)行,3T3-L1前脂肪細(xì)胞體積增大,形態(tài)變圓,并出現(xiàn)脂滴。熒光染色后,脂滴呈“戒環(huán)樣”圍繞細(xì)胞核分布,且誘導(dǎo)分化第8d脂滴直徑明顯大于第4d。2.誘導(dǎo)分化第0d、4d和8d,細(xì)胞中TG含量呈上升趨勢(shì)。3.3T3-L1脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)染2d后,各組轉(zhuǎn)染率均大于40%。與陰性轉(zhuǎn)染組相比,3組陽(yáng)性載體均能顯著下調(diào)PLIN1A蛋白的表達(dá)(P0.05)。4.轉(zhuǎn)染sh-PLIN1干擾載體后,與陰性轉(zhuǎn)染組相比,sh-PLIN1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中脂滴減小,TG含量降低,甘油含量升高;ATGL和HSL表達(dá)量顯著升高(P0.05),p-HSL表達(dá)量及cAMP、PKA的濃度均無(wú)顯著性差異(P0.05)。5.ISO與sh-PLIN1干擾載體共同干預(yù)細(xì)胞后,與陰性轉(zhuǎn)染組相比,ISO+sh-PLIN1轉(zhuǎn)染組和sh-PLIN1轉(zhuǎn)染組中ATGL表達(dá)量均顯著升高(P0.05),且2組之間無(wú)明顯差異(P0.05)。同時(shí),ISO+sh-PLIN1轉(zhuǎn)染組和ISO+陰性轉(zhuǎn)染組中TG含量降低,甘油含量升高;HSL、p-HSL表達(dá)量及cAMP、PKA的濃度均顯著升高(P0.05),并且這些指標(biāo)在2組中均無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.sh-PLIN1干擾載體構(gòu)建成功,并且可有效下調(diào)PLIN1A蛋白的表達(dá)。2.sh-PLIN1干擾載體可促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂解,其機(jī)制可能通過(guò)上調(diào)ATGL和HSL的表達(dá)而實(shí)現(xiàn),而且cAMP/PKA信號(hào)通路對(duì)其無(wú)明顯調(diào)節(jié)作用。3.ISO可通過(guò)激活cAMP/PKA信號(hào)通路,上調(diào)HSL和p-HSL的表達(dá)而發(fā)揮促脂解的作用,而sh-PLIN1干擾載體的促脂解作用可能并非通過(guò)cAMP/PKA信號(hào)通路介導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：圍脂滴蛋白 RNA干擾 3T3-L1脂肪細(xì)胞 異丙腎上腺素 脂解
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表10-12
• 前言12-14
• 第一部分 3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及脂滴熒光染色方法建立14-22
• 1 材料與方法14-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 2 結(jié)果18-20
• 2.13T3-L1前脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察18-19
• 2.2 細(xì)胞誘導(dǎo)分化及脂滴熒光染色19-20
• 2.3 細(xì)胞中TG含量20
• 3 討論20-21
• 4 結(jié)論21-22
• 第二部分PLIN1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定22-35
• 1 材料與方法22-30
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法25-30
• 2 結(jié)果30-33
• 2.1 sh-PLIN1重組載體菌液PCR及測(cè)序鑒定30-31
• 2.2 質(zhì)粒濃度、純度測(cè)定及大小鑒定31-32
• 2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率32-33
• 2.4 重組載體對(duì)PLIN1A蛋白表達(dá)的影響33
• 3 討論33-34
• 4 結(jié)論34-35
• 第三部分 沉默PLIN1基因?qū)?3T3-L1脂肪細(xì)胞脂解的影響35-42
• 1 材料與方法35-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法36-38
• 2 結(jié)果38-40
• 2.1 sh-PLIN1干擾載體對(duì)脂滴形態(tài)的影響38-39
• 2.2 sh-PLIN1干擾載體對(duì)TG和甘油含量的影響39
• 2.3 sh-PLIN1干擾載體對(duì)ATGL、HSL和p-HSL蛋白表達(dá)的影響39-40
• 2.4 sh-PLIN1干擾載體對(duì)cAMP/PKA信號(hào)通路的影響40
• 3 討論40-41
• 4 結(jié)論41-42
• 第四部分 異丙腎上腺素與sh-PLIN1干擾載體聯(lián)合干預(yù)對(duì) 3T3-L1脂肪細(xì)胞脂解影響的實(shí)驗(yàn)研究42-47
• 1 材料與方法42-43
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 2 結(jié)果43-45
• 2.1 ISO與sh-PLIN1干擾載體聯(lián)合干預(yù)對(duì)TG和甘油含量的影響43-44
• 2.2 ISO與sh-PLIN1干擾載體聯(lián)合干預(yù)對(duì)ATGL、HSL和p-HSL蛋白表達(dá)的影響44-45
• 2.3 ISO與sh-PLIN1干擾載體聯(lián)合干預(yù)對(duì)cAMP和PKA含量的影響45
• 3 討論45-46
• 4 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-60
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷61

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1 朱曉海;脂肪細(xì)胞培養(yǎng)[J];實(shí)用美容整形外科;1994年02期

2 ;脂肪細(xì)胞也會(huì)更新?lián)Q代[J];祝您健康;2009年09期

3 ;關(guān)于脂肪細(xì)胞的新發(fā)現(xiàn)可能有助于減肥[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);2003年03期

4 劉婕婷;劉毅;;脂肪細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2007年02期

5 ;脂肪細(xì)胞也有抗炎作用[J];中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析;2008年06期

6 信延寧;張海峰;;運(yùn)動(dòng)對(duì)脂肪細(xì)胞體積和數(shù)目的影響[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2011年12期

7 ;科學(xué)家新分離出的脂肪細(xì)胞可能對(duì)肥胖治療有益[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2012年03期

8 夏雷;張奇志;張亞楠;;脂肪細(xì)胞間信息通訊的多種機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2012年11期

9 朱政,孫冊(cè),沈昭文;脂肪細(xì)胞膜凝集素的初步研究[J];中國(guó)科學(xué)(B輯 化學(xué) 生物學(xué) 農(nóng)學(xué) 醫(yī)學(xué) 地學(xué));1984年09期

10 ;上海第二醫(yī)科大學(xué)一項(xiàng)研究否定成人脂肪細(xì)胞不增殖觀點(diǎn)[J];河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年03期

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1 溫宇;楊?yuàn)檴?胡秀芬;盧慧玲;劉婧;;脂肪酸誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞促�；鞍椎挚辜皺C(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

2 何玉秀;陳龍浩;張海峰;信延寧;;對(duì)脂肪細(xì)胞數(shù)目和體積測(cè)算方法的比較研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2012年年會(huì)論文文摘匯編[C];2012年

3 周虎;洪尚宇;廖侃;夏其昌;曾嶸;;3T3-L1脂肪細(xì)胞及前脂肪細(xì)胞的分泌蛋白質(zhì)的大規(guī)模鑒定[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

4 湯其群;;脂肪細(xì)胞的發(fā)育分化與肥胖的防治[A];第七屆全國(guó)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國(guó)臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨醫(yī)學(xué)生化分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2011年

5 逯偉達(dá);Hengwei Zhang;Yingchun Zhao;Rui Cao;Peijing Rong;Weikuan Gu;Jing Xiao;Dengshun Miao;Joan Lappe;Robert Recker;高海青;Gary Guishan Xiao;;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的脂肪細(xì)胞在成骨細(xì)胞發(fā)生過(guò)程中抑制作用機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 錢(qián)鳳芹;劉國(guó)霞;;豬脂肪細(xì)胞膜免疫調(diào)控的研究[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

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10 彭永德;丁曉穎;董維平;王育瑤;王煜非;程群;江博仁;楊穎;;炎癥通路激活狀態(tài)對(duì)3T3L1脂肪細(xì)胞胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

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1 惠 叢;科學(xué)家為脂肪細(xì)胞平反[N];中國(guó)質(zhì)量報(bào);2004年

2 朱抗美（教授）;脂肪細(xì)胞與肥胖[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2002年

3 李學(xué)梅;減肥易反彈,原是脂肪細(xì)胞“復(fù)活”[N];新華每日電訊;2008年

4 夏;脂肪細(xì)胞庇護(hù)結(jié)核菌[N];健康報(bào);2007年

5 劉國(guó)信;適度豐滿有益健康[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

6 劉元江;減肥之路,為何如此艱難？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

7 曉芙;塑造理想的腰腹曲線[N];甘肅經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2000年

8 儲(chǔ)國(guó)強(qiáng) 支勇平;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)控豬肉肥瘦機(jī)理[N];新華每日電訊;2003年

9 中華醫(yī)學(xué)會(huì)北京分會(huì) 方紅娟;女性的脂肪細(xì)胞比男性多[N];健康報(bào);2011年

10 蘭政文;減肥新思路：以“補(bǔ)”瘦身[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

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1 馬世瞻;促甲狀腺激素通過(guò)甘油磷酸�；D(zhuǎn)移酶3調(diào)節(jié)甘油三酯合成[D];山東大學(xué);2015年

2 劉品;草魚(yú)脂肪細(xì)胞發(fā)育及HUFA對(duì)其影響的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 余文;脂肪細(xì)胞及脂肪因子調(diào)控多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖和耐藥的研究[D];華中科技大學(xué);2015年

4 毋文靜;CTRP6調(diào)控豬脂肪細(xì)胞成脂的作用與機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

5 鐘巧青;高密度脂蛋白對(duì)炎性脂肪細(xì)胞功能的影響[D];中南大學(xué);2007年

6 董劭壯;炎癥對(duì)脂肪細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制探討[D];中南大學(xué);2007年

7 于莉莉;模式識(shí)別受體介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞天然抗病毒反應(yīng)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 葉峰;3T3-L1細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)及其部分相關(guān)蛋白功能的研究[D];中南大學(xué);2011年

9 錢(qián)淑文;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞過(guò)程中的基本特征及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

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1 張燕;IL-18、TNF-α對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞、RAW264.7巨噬細(xì)胞慢性炎癥作用的初步研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

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4 蔣云;可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑對(duì)脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝及分泌功能的影響[D];中南大學(xué);2010年

5 王慧;黃連五種單體對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 丁亞琴;rVisfatin干預(yù)人脂肪細(xì)胞的功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

7 白亮;Sirt1在豬脂肪細(xì)胞增殖分化過(guò)程中的調(diào)控作用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

8 湯莎莎;促甲狀腺激素對(duì)脂肪細(xì)胞促炎癥因子分泌的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

9 路玲玲;以脂肪細(xì)胞分泌因子脂聯(lián)素為靶點(diǎn)的具有減肥作用中藥的初步篩選[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2013年

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本文編號(hào)：495358