本文關(guān)鍵詞：PLCE1基因及rs2274223和rs3765524單體型的克隆與表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:克隆人PLCE1基因,構(gòu)建PLCE1 rs2274223和rs3765524 GT(PLCE1 Minor)和AC(PLCE1 Major)單體型真核表達(dá)重組載體,研究PLCE1基因多態(tài)性及單體型與基因表達(dá)的相關(guān)性。方法:利用重疊延伸PCR、In-Fusion技術(shù)構(gòu)建PLCE1真核表達(dá)載體;基于同源重組的雙點(diǎn)突變技術(shù)改造目的基因;利用基因轉(zhuǎn)染、實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡等技術(shù)實(shí)現(xiàn)PLCE1表達(dá)載體在真核細(xì)胞中的過表達(dá)及表達(dá)水平的鑒定。結(jié)果:成功擴(kuò)增并獲得了全長6 927bp的人PLCE1 cDNA并經(jīng)過DNA測序證實(shí),與NCBI數(shù)據(jù)庫PLCE1參考序列(NM_016341)比較,發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)3 554~3 572bp處存在18bp連續(xù)堿基插入,其余序列基本匹配。成功構(gòu)建了PLCE1 Minor和PLCE1 Major兩種單體型重組真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染細(xì)胞揭示PLCE1 Minor型的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均高于Major型。結(jié)論:發(fā)現(xiàn)了一種新的PLCE1 mRNA轉(zhuǎn)錄本,成功構(gòu)建了2種單體型真核表達(dá)載體;發(fā)現(xiàn)PLCE1 rs2274223G-rs3765524T單體型能夠促進(jìn)自身mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá),為進(jìn)一步揭示PLCE1 SNPs與癌癥易感性的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 磷脂酶C-ε 單核苷酸多態(tài)性 重疊延伸PCR 基因克隆 基因表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81272276) 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(2010CB933902)資助項(xiàng)目
【分類號】：Q789
【正文快照】： 磷脂酶C-ε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)是磷脂酶C家族新成員,其編碼基因位于染色體10q23,主要通過不同的剪接方式編碼兩種異構(gòu)體蛋白,分別為PLCE1a和PLCE1b,它們分別含2302和1994個(gè)氨基酸[1]。近年來研究表明,PLCE1基因與皮膚腫瘤[2]、胃癌和食道癌[3-5]的發(fā)生和發(fā)展

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王瑞省,吳凌云,張繼紅,章祥蓀;單體型裝配問題及其算法(英文)[J];高校應(yīng)用數(shù)學(xué)學(xué)報(bào)A輯(中文版);2004年S1期

2 姜文錫;邱長春;程祖亨;周文郁;顧明亮;許群;方鳴武;牛文全;瑪依拉;;載脂蛋白B基因單體型與中國維吾爾族自然長壽的關(guān)聯(lián)研究[J];中國科學(xué)C輯:生命科學(xué);2006年05期

3 楊英杰;;單體型裝配問題的研究現(xiàn)狀[J];銅仁學(xué)院學(xué)報(bào);2011年02期

4 李珍萍,王勇,趙玉英,章祥蓀;單體型推斷問題與配對圖(英文)[J];高校應(yīng)用數(shù)學(xué)學(xué)報(bào)A輯(中文版);2004年S1期

5 甄建新;何柳媚;王大明;徐筠娉;鄧志輝;;中國南方漢族人群KIR基因多態(tài)性的研究[J];中國輸血雜志;2012年S1期

6 胡勁松,黨娜娜,黃辰,宋土生;國際人類基因組單體型圖計(jì)劃[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;2005年03期

7 楊劍豪;劉[?;孫瑛;謝軍華;鄭皆煒;陸瑤;杜可明;;5186例上海漢族無關(guān)臍帶血HLA基因多態(tài)性研究[J];中國輸血雜志;2011年12期

8 杜勝軍;惠汝太;;關(guān)聯(lián)性研究中的單體型分析[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2006年04期

9 劉杰;張春燕;侯玲;李勇;張翅;;黑龍江地區(qū)漢族HLA-A、B、DRB1基因及單倍型的研究與應(yīng)用[J];中國輸血雜志;2009年03期

10 李彩霞;黎培興;方積乾;;基于單體型重構(gòu)的傳遞不平衡檢驗(yàn)[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龔莎莎;張婷;鄭靜;呂建新;管敏鑫;;氨基糖甙類抗生素耳毒性相關(guān)的線粒體DNA繼發(fā)突變[A];遺傳學(xué)與社會可持續(xù)發(fā)展——2010中國青年遺傳學(xué)家論壇論文摘要匯編[C];2010年

2 鄧立彬;高揚(yáng);馬素芳;張悅正;康健;曾長青;;應(yīng)用單體型圖進(jìn)行疾病相關(guān)基因和基因組結(jié)構(gòu)變異的定位研究[A];中國遺傳學(xué)會“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會論文匯編集[C];2007年

3 陳慧峰;林育純;林麗娜;李文;羅潔;張樹江;萬建新;陳雯;林忠寧;;廣東漢族人群PP2A-Aα亞基基因5'-側(cè)翼區(qū)多態(tài)性的單體型分析[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2010年

4 徐新娟;梁曉慧;陳玉嵐;珠勒皮亞;李素華;;VEGF基因單核苷酸多態(tài)性及其單體型與新疆維吾爾族長壽的關(guān)聯(lián)研究[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

5 聶晶;胡揚(yáng);何子紅;李燕春;衣龍燕;許春燕;王海燕;;VEGF基因單核苷酸多態(tài)性及單體型與杰出有氧運(yùn)動能力的關(guān)聯(lián)研究[A];第九屆全國體育科學(xué)大會論文摘要匯編(2)[C];2011年

6 陳慧峰;林育純;張樹江;李曉杰;羅潔;林麗娜;李文;胡耀明;陳雯;林忠寧;;PPP2R1A基因啟動子區(qū)高甲基化對其不同單體型轉(zhuǎn)錄功能活性影響[A];全國生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

7 林育純;陳慧峰;方飛;林麗娜;陳雯;凌文華;Baitang Ning;Fred F Kadlubar;林忠寧;;磺酸基轉(zhuǎn)移酶1A1基因啟動子區(qū)SNPs位點(diǎn)單體型及其功能分析[A];遺傳學(xué)進(jìn)步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

8 孫瞳;高揚(yáng);譚文;馬素芳;張雪梅;王永崗;張清潤;郭永麗;趙丹;曾長青;林東昕;;染色體11q22基質(zhì)金屬蛋白酶基因簇單體型與肺癌發(fā)生發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)(英文)[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

9 張繼紅;吳凌云;王勇;李珍萍;章祥蓀;;由基因型SNP數(shù)據(jù)推斷相應(yīng)單體型的Markov鏈統(tǒng)計(jì)方法(英文)[A];中國運(yùn)籌學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)交流會論文集（下卷）[C];2004年

10 侯玲;劉杰;李鑫;丁鐫;孫建華;趙國慶;;黑龍江地區(qū)蒙古族HLA-A、B、DRB1等位基因及單體型的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 本報(bào)記者 李雪墨 李斌;單體型圖破解人類基因組奧秘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

2 ;科學(xué)家將合力繪制人類基因組遺傳整合圖中國卷[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

3 張荔子 張清潤;注釋“天書”[N];健康報(bào);2006年

4 張荔子;血樣有助于破解遺傳之謎[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

5 本報(bào)記者　賈婧;尋找致病基因和群體遺傳學(xué)研究的“金礦”[N];科技日報(bào);2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 汪穎;單體型和基因型問題的優(yōu)化模型和算法[D];大連理工大學(xué);2007年

2 王濤;中國人苯丙氨酸羥化酶基因突變的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1994年

3 張永彪;中國6個(gè)民族群體HLA區(qū)域內(nèi)TNF基因簇的核苷酸變異和單體型多態(tài)性[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

4 武金才;腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因HTPAP單體型與肝癌轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

5 梁曉慧;TERT、VEGF基因單核苷酸多態(tài)性及其單體型與新疆維吾爾族長壽的關(guān)聯(lián)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

6 余志杰;Tim-3基因多態(tài)性與湖北漢族人群AML的關(guān)聯(lián)分析研究[D];華中科技大學(xué);2014年

7 張強(qiáng)鋒;單體分型和單體型頻率估計(jì)[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2006年

8 謝民主;單體型組裝問題參數(shù)化建模及算法研究[D];中南大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 湯栩?qū)?基于單體型的致病基因區(qū)域發(fā)現(xiàn)算法研究[D];吉林大學(xué);2008年

2 王彥坤;高通量測序檢測榕小蜂COI基因異質(zhì)性及其對分子鑒定的影響[D];河北大學(xué);2015年

3 解惠堅(jiān);PPARα/δ/γ單核苷酸多態(tài)性及交互作用與脂蛋白(a)的關(guān)聯(lián)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 海波;過氧化物酶體增殖物激活受體α/γ單核苷酸多態(tài)性與TG/HDL-C比值、LDL-C/HDL-C比值的相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 趙明曉;基于分割策略的生物單體型數(shù)據(jù)推導(dǎo)算法研究[D];大連海事大學(xué);2015年

6 張路寧;酪氨酸蛋白激酶-2基因多態(tài)性與漢族人群肥胖易感性的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2016年

7 楊鐠捚;多倍體單體型重建算法的研究[D];湖南師范大學(xué);2016年

8 牛紅;利用單體型進(jìn)行中國西門塔爾牛全基因組選擇的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

9 王兆燦;K單體型重建算法的研究[D];廣西師范大學(xué);2014年

10 羅鋒;基于圖論的單體型重建算法設(shè)計(jì)和可視化實(shí)驗(yàn)平臺的構(gòu)建[D];湖南師范大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：PLCE1基因及rs2274223和rs3765524單體型的克隆與表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：491579