本文關(guān)鍵詞：黃瓜CsERECTA基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：ERECTA基因編碼一個富含亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)的絲/蘇氨酸類受體蛋白激酶,參與調(diào)控植物器官的形態(tài)建成,在株型控制及抗逆方面也有重要作用。該研究通過構(gòu)建帶有maltose binding protein(MBP)標(biāo)簽的pET21a-CsERECTA融合蛋白原核表達(dá)載體,實現(xiàn)了在大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3)中的高效表達(dá),并對誘導(dǎo)表達(dá)的溫度、時間和IPTG濃度進行了優(yōu)化。利用鎳離子螯合層析純化得到MBP-CsERECTA融合蛋白,再用rTEV蛋白酶對其進行酶切,得到CsERECTA蛋白并制備了該蛋白的多克隆抗體。結(jié)果表明,黃瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵體2種形式表達(dá),低溫有助于蛋白以可溶性形式大量存在。最佳誘導(dǎo)溫度為23℃,誘導(dǎo)時間為6h,IPTG濃度為0.5mmol·L~(-1)。通過Western blot可檢測到黃瓜內(nèi)源的CsERECTA蛋白,說明制備的多可隆抗體具有較好的特異性。多克隆抗體的成功制備為進一步研究CsERECTA的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 黃瓜 CsERECTA基因 原核表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31071791) 高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金(YQ2013003) 西北農(nóng)林科技大學(xué)國際科技合作基金項目
【分類號】：Q943.2;S642.2
【正文快照】： ERECTA是一個編碼富含亮氨酸重復(fù)序列的類受體蛋白激酶基因[1]。植物ERECTA基因控制著植株生長發(fā)育的多個方面,比如地上部分器官的伸長、葉的生長、花序的發(fā)育和表皮的分化等[2]。由于ERECTA突變體是在Landsberg背景的擬南芥中發(fā)現(xiàn)的,其具有矮生的特性,便于培養(yǎng)和操作,因此目

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本文編號：470572