本文關(guān)鍵詞：出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過觀察下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因的表達(dá)情況探討出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能的潛在影響及其可能的機(jī)制。方法:本研究采用SD大鼠為研究對象,32只孕鼠隨機(jī)分配到4個劑量組內(nèi),即溶劑對照組(玉米油)、低劑量組(2mg/kg)、中劑量組(10mg/kg)和高劑量組(50mg/kg)。孕鼠自G14至G19,每天一次灌胃染毒。新生24h內(nèi)大鼠斷頭處死分離下丘腦組織,液氮冷凍-80℃保存,采用雙洗滌劑緩沖液系統(tǒng)的方法進(jìn)行RNA提取,選取70日齡左右的成年大鼠,雄性大鼠斷頭處死,雌性大鼠在動情間期斷頭處死,取大腦組織,切成1mm厚的大腦切片,根據(jù)大鼠腦解剖定位圖譜選擇三個與生殖神經(jīng)內(nèi)分泌相關(guān)的三個核團(tuán),分別為前腹側(cè)室旁核(Anteroventral periventricμlar nucleus,AVPV)和視前內(nèi)側(cè)核(medial preoptic nucleus,MPN)與弓狀核(Arcuate nucleus,ARC),在三個核團(tuán)區(qū)域采用直徑為1.25mm的打孔針進(jìn)行打孔取樣,液氮冷凍-80℃保存,采用RNeasy Mini Kit(cat.74104,74106)試劑盒進(jìn)行提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄采用High Capacity c DNA Reverse Transcription Kits試劑盒,采用自行設(shè)計(jì)的48基因芯片Taq Man?Array Cards對神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果:1、出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響:(1)在下丘腦類固醇激素受體和共調(diào)節(jié)因子基因中,有Esr2和Cyp19a1兩個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露影響。對Esr2基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);對Cyp19a1基因,在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05)。(2)在下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)受體基因中,有Drd1a、Grin2a和Mtnr1a三個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Drd1a基因,在雌性2mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);對于Grin2a基因,在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);對于Mtnr1a基因,在雄性10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05)。(3)在下丘腦神經(jīng)肽受體基因中有Kiss1r和Tacr3兩個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Kiss1r基因和Tacr3基因在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05)。(4)在下丘腦神經(jīng)激素受體基因中僅有Avpr1a一個基因的的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Avpr1a基因,在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);在雌性50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05)。(5)在下丘腦轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子基因中有Arntl,Clock,Dbp和Per2四個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Arntl基因,在雄性10mg/kg劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);對于Clock基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);對于Dbp基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);對于Per2基因,在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05)。2、出生前DEHP暴露對成年大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響:(1)在AVPV區(qū)域中有Crhr1,Drd2,Mc3r和Tacr3四個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。在成年雄性大鼠中,Crhr1基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);Drd2基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);在成年雌性大鼠中,Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Mc3r基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Tacr3基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05)。(2)在MPN區(qū)域有Avp,Hcrtr2,Avpr1a,Crhr1,Kiss1r,和Tacr3六個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響。在成年雄性大鼠中,Avp基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Hcrtr2基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);Tacr3基因在10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);在成年雌性大鼠中,Avpr1a基因在10mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Kiss1r基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);(3)在ARC區(qū)域中有Avp,Esr1,Ghrh,Kiss1,Npy,Pomc和Trh七個基因的表達(dá)水平受到出生前DEHP暴露的影響,且七個基因表達(dá)水平改變均集中在雄性大鼠。Avp基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);Esr1基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Ghrh基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Kiss1基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Npy基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Pomc基因在2mg/kg,10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著低于對照組(P0.05);Trh基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05);結(jié)論:1、出生前DEHP暴露可影響新生大鼠和成年大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因的表達(dá),可能會對腦的性別分化和發(fā)育產(chǎn)生影響。2、出生前DEHP暴露對成年大鼠AVPV、MPN和ARC區(qū)域神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因的表達(dá)產(chǎn)生不同的干擾作用,可能會對成年大鼠的生殖、學(xué)習(xí)記憶、應(yīng)激等神經(jīng)內(nèi)分泌行為產(chǎn)生影響作用。3、出生前DEHP暴露對大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響具有性別差異、劑量差異以及發(fā)育階段差異。
【關(guān)鍵詞】：出生前 DEHP 大鼠 下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌 基因
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號說明13-15
• 前言15-18
• 研究現(xiàn)狀、成果15-16
• 研究目的、方法16-18
• 1 對象和方法18-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物18
• 1.2 主要試劑18-19
• 1.3 主要儀器和設(shè)備19
• 1.4 主要試劑及配置方法19-20
• 1.5 動物處死及取材20-21
• 1.6 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄21-22
• 1.7 RT-PCR和TaqMan? Low Density Array22-24
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24
• 2 結(jié)果24-33
• 2.1 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響24-28
• 2.1.1 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦類固醇激素受體和共調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)的影響25
• 2.1.2 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)受體基因表達(dá)的影響25-26
• 2.1.3 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)肽受體基因表達(dá)的影響26-27
• 2.1.4 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)激素受體基因表達(dá)的影響27
• 2.1.5 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)的影響27-28
• 2.2 出生前DEHP暴露對成年大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響28-33
• 2.2.1 出生前DEHP暴露對AVPV核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響28-29
• 2.2.2 出生前DEHP暴露對MPN核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響29-31
• 2.2.3 出生前DEHP暴露對ARC核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響31-33
• 3 討論33-46
• 3.1 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響33-37
• 3.1.1 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦類固醇激素受體和共調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)的影響33-34
• 3.1.2 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)受體基因表達(dá)的影響34-35
• 3.1.3 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)肽受體基因表達(dá)的影響35-36
• 3.1.4 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)激素受體基因表達(dá)的影響36
• 3.1.5 出生前DEHP暴露對新生大鼠下丘腦轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)的影響36-37
• 3.2 出生前DEHP暴露對成年大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響37-44
• 3.2.1 出生前DEHP暴露對AVPV核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響38-40
• 3.2.2 出生前DEHP暴露對MPN核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響40-42
• 3.2.3 出生前DEHP暴露對ARC核團(tuán)神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響42-44
• 3.3 大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的劑量效應(yīng)44-45
• 3.4 大鼠不同性別及不同發(fā)育階段神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的變化45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 附錄60-66
• 綜述 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的神經(jīng)毒性作用66-77
• 綜述參考文獻(xiàn)71-77
• 致謝77-78
• 個人簡歷78

  本文關(guān)鍵詞：出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能相關(guān)基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：457316