本文關(guān)鍵詞：黃花苜蓿MfDREB1轉(zhuǎn)錄因子在提高轉(zhuǎn)基因煙草抗逆性中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以T1代超表達(dá)黃花苜蓿逆境脅迫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子MfDREB1的心葉煙草和轉(zhuǎn)化不含目的基因的空載體的轉(zhuǎn)基因心葉煙草為研究材料,自交篩選獲得了轉(zhuǎn)基因煙草T3代純合株系72個(gè)。在實(shí)驗(yàn)室條件下,分別用0℃、300 mM NaCl和20%PEG6000模擬非生物環(huán)境脅迫處理野生型和轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株A3-6和B3-8,煙草植株抗逆表型顯示MfDREB1明顯提高了轉(zhuǎn)基因煙草的抗逆性。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),分析了3種逆境脅迫條件下的轉(zhuǎn)基因煙草植株外源MfDREB1基因以及受其調(diào)控的下游抗逆基因NtERD10A和NtP5CS的表達(dá),結(jié)果表明低溫、高鹽和干旱非生物脅迫處理后,轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株A3-6中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相對(duì)表達(dá)量均呈現(xiàn)先升高后降低再升高的趨勢(shì)；而脅迫處理前后,野生型心葉煙草和轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株B3-8中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯變化。以超表達(dá)載體pPZP221 (35S-MfDREB1-NOS)中MfDREB1基因的3'端序列(238 bp)和NOS片段(253 bp)的重組片段(491 bp)做為雜交探針,運(yùn)用地高辛標(biāo)記法,對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草純合植株進(jìn)行Southern Blot檢測(cè),結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株A3-6的基因組中有3拷貝外源重組片段插入,而野生型煙草和轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株B3-8的基因組中沒(méi)有檢測(cè)到外源重組片段的插入。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)錄因子 MfDREB1 非生物脅迫 煙草 抗逆性
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 部分縮寫(xiě)詞說(shuō)明9-10
• 第一章 引言10-23
• 1.1 轉(zhuǎn)錄因子概述10
• 1.2 植物的非生物脅迫應(yīng)答機(jī)制10-11
• 1.3 DREB轉(zhuǎn)錄因子及受其調(diào)控的下游抗逆相關(guān)基因11-17
• 1.3.1 DREB轉(zhuǎn)錄因子11-15
• 1.3.2 受DREB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的下游抗逆相關(guān)基因15-17
• 1.4 DREB轉(zhuǎn)錄因子在提高植物抗逆性中的作用17-19
• 1.5 黃花苜蓿MfDREB1轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其生物學(xué)分析19-21
• 1.6 黃花苜蓿及轉(zhuǎn)基因T_1代煙草21-22
• 1.7 本研究的目的和意義22-23
• 第二章 轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合株系的篩選23-29
• 2.1. 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.1.1 植物材料23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 2.2.1 三種植物材料的處理與培養(yǎng)24
• 2.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草植株的慶大霉素篩選及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)24-25
• 2.2.3 轉(zhuǎn)基因心葉煙草純合植株材料的獲得25-27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析27-29
• 2.3.1 轉(zhuǎn)基因煙草植株的慶大霉素篩選及純合植株的獲得27-29
• 第三章 轉(zhuǎn)基因心葉煙草的抗逆性的作用研究29-53
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料29-32
• 3.1.1 植物材料29
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑29
• 3.1.3 引物設(shè)計(jì)及合成29-32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法32-39
• 3.2.1 煙草幼苗材料的培養(yǎng)32
• 3.2.2 非生物脅迫處理32-33
• 3.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草外源MfDREB1基因的表達(dá)分析33-36
• 3.2.4 Southern Blot36-39
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析39-53
• 3.3.1 非生物脅迫處理下的煙草表型分析40-43
• 3.3.2 轉(zhuǎn)基因煙草外源MfDREB1基因的表達(dá)分析43-50
• 3.3.3 Southern Blot50-53
• 第四章 討論與結(jié)論53-56
• 4.1 討論53-55
• 4.2 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：453224