本實(shí)驗(yàn)利用RACE-PCR技術(shù)克隆了蛤仔HSP60基因全長,結(jié)果表明,蛤仔HSP60c DNA全長1777bp(含ploy A序列),Gen Bank登錄號:KT987978,包括1728bp的開放閱讀框(ORF),21bp的5’端非編碼區(qū)(5’-UTR)和49bp的3’端非編碼區(qū)(3’-UTR),編碼575個(gè)氨基酸,推導(dǎo)蛋白分子量(Mw)為61.25 k Da,等電點(diǎn)(p I)為5.04,N末端無信號肽結(jié)構(gòu),序列同源性比對發(fā)現(xiàn)該基因與已知的HSP60基因序列同源性較高(80%)。本研究首次成功克隆了菲律賓蛤仔的HSP60基因全長,為進(jìn)一步深入研究蛤仔的抗逆機(jī)理及其遺傳改良奠定了基礎(chǔ)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),對HSP40、60、90基因在野生及3種殼色品系(海洋橙、斑馬、白蛤)蛤仔的血細(xì)胞、閉殼肌、外套膜、足、鰓和消化腺中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示:HSP40、60、90在野生和3種殼色蛤仔不同組織均有表達(dá)。以外套膜中的表達(dá)量為對照組,其中,HSP40基因在野生和3種殼色鰓組織中表達(dá)水平最高(p<0.01),而在閉殼肌中的表達(dá)水平最低;HSP60基因在野生、海洋橙和斑馬蛤血...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1蛤仔總RNA提取結(jié)果

er進(jìn)行信號肽預(yù)測（http://www.c.2.0進(jìn)行HSP60蛋白跨膜區(qū)分析y的ProtScale工具對預(yù)測序列的CBI和smart軟件對預(yù)測序列的yHits的MotifScan工具對HSbin/PFSCAN）利用二級結(jié)構(gòu)及三r/cgi-bi....

圖2-2蛤仔HSP60基因3’RACE擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

HSP60基因3’RACE擴(kuò)增DNAMaker;1,2:蛤仔3’RAlippinarumHSP603’RACEaDNAMarker,Lane1,2:PCRpHSP60基因5’RACE擴(kuò)增NAMaker;A,B:蛤仔5’RAlipp....

圖2-3蛤仔HSP60基因5’RACE擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

采用巢式PCR對HSP60基因的3’-和5’-末端序列進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果如圖2-2，圖2-3所示，1，2號泳道為3’末端擴(kuò)增產(chǎn)物，A，B號泳道為5’末端擴(kuò)增產(chǎn)物。

圖2-4蛤仔HSP60基因全長cDNA序列及氨基酸序列

3’RACE-PCR和5’RACE-PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測（圖2-2和圖2-3），分別獲得643bp的3’RACE產(chǎn)物和879bp的5’RACE產(chǎn)物，通過序列拼接，最終獲得蛤仔HSP60基因cDNA全序列(圖2-4)。序列分析表明，蛤仔HSP60基....

本文編號：4044485