發(fā)布時(shí)間：2025-04-11 05:09

　　C2H2型鋅指蛋白是鋅指家族中最經(jīng)典也是目前研究最為深入的一類鋅指蛋白。該類鋅指蛋白中具有在植物中特有的基序QALGGH,表明C2H2型鋅指蛋白在植物的生長過程中發(fā)揮了重要的作用。此外,它還參與非生物脅迫和生物脅迫。本研究利用生物信息學(xué)方法和軟件,對番茄基因組中C2H2家族成員進(jìn)行全面鑒定挖掘,并對該家族進(jìn)行了系統(tǒng)的生物信息學(xué)分析,同時(shí)對部分家族成員進(jìn)行了組織特異性及逆境脅迫下的表達(dá)模式分析,為該家族基因的深入研究奠定基礎(chǔ),研究結(jié)果表明:1番茄基因組共編碼99個(gè)C2H2型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄子基因,基于進(jìn)化分析將這99個(gè)基因分成4組。將每個(gè)C2H2型鋅指蛋白的物理性質(zhì)相關(guān)數(shù)據(jù)如,分子質(zhì)量、pI值和蛋白質(zhì)長度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。分析了該家族蛋白的基因結(jié)構(gòu),并找到了15個(gè)基序。99個(gè)C2H2型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄子基因中有96個(gè)不均等的分步在12條染色體上。分析得到了一些與脅迫相關(guān)、激素相關(guān)、組織特異性表達(dá)相關(guān)的啟動(dòng)子序列。2將全家族99個(gè)基因進(jìn)行因物設(shè)計(jì),并最終成功設(shè)計(jì)出21個(gè)家族成員的引物序列。對21個(gè)典型的C2H2型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄子基因進(jìn)行組織特異性表達(dá)模式分析,結(jié)果表明,SlZF-24和SlZF-28在根中表...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 研究的目的與意義
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 C2H2型鋅指蛋白的概念與結(jié)構(gòu)
        1.2.2 C2H2型鋅指蛋白的分類
        1.2.3 C2H2型鋅指蛋白的功能
        1.2.4 番茄中的C2H2型鋅指蛋白
    1.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族生物信息學(xué)的分析
        2.1.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族成員的鑒定和進(jìn)化分析
        2.1.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因結(jié)構(gòu)和基序分析
        2.1.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因染色體定位
        2.1.4 番茄C2H2型鋅指蛋白基因順式作用元件分析
    2.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因組織特異性表達(dá)及脅迫處理下熒光定量表達(dá)分析
        2.2.1 植物材料和脅迫處理
        2.2.2 營養(yǎng)液的配制
        2.2.3 RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
    2.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因SlZF-36VIGS分析
        2.3.1 pTRV2:SlZF-36沉默載體構(gòu)建
        2.3.2 番茄植株侵染
        2.3.3 SlZF-36沉默植株鑒定
        2.3.4 SlZF-36沉默植株脅迫處理及基因表達(dá)量檢測
    2.4 脅迫植株的相關(guān)生理指標(biāo)的測定
        2.4.1 丙二醛(MDA)活性檢測
        2.4.2 過氧化物酶(POD)活性檢測
        2.4.3 氣孔觀察
        2.4.4 活性氧檢測
        2.4.5 葉綠素?zé)晒鈪?shù)檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族生物信息學(xué)的分析
        3.1.1 番茄C2H2型鋅指蛋白家族成員鑒定及進(jìn)化分析
        3.1.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因結(jié)構(gòu)和基序分析
        3.1.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因染色體定位
        3.1.4 番茄C2H2型鋅指蛋白基因順式作用元件分析
    3.2 番茄C2H2型鋅指蛋白基因組織特異性表達(dá)分析
        3.2.1 植物組織取樣結(jié)果
        3.2.2 RNA提取結(jié)果
        3.2.3 組織特異性表達(dá)分析
    3.3 番茄C2H2型鋅指蛋白基因在脅迫處理下熒光定量表達(dá)分析
        3.3.1 脅迫處理下番茄葉片總RNA提取
        3.3.2 脅迫處理基因的表達(dá)分析
    3.4 pTRV2:SlZF-36基因沉默載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌侵染
        3.4.1 SlZF-36片段擴(kuò)增
        3.4.2 pTRV2空載質(zhì)粒及pTRV2:PDS質(zhì)粒提取
        3.4.3 質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.4.4 重組質(zhì)粒測序結(jié)果
        3.4.5 PDS沉默結(jié)果
        3.4.6 SlZF-36沉默植株脅迫處理表型觀察結(jié)果
    3.5 SlZF-36沉默植株和空載對照植株脅迫處理基因表達(dá)量檢測
    3.6 SlZF-36沉默植株相關(guān)生理指標(biāo)的測定
        3.6.1 丙二醛(MDA)活性檢測
        3.6.2 過氧化物酶(POD)活性檢測
        3.6.3 氣孔觀察
        3.6.4 活性氧檢測
        3.6.5 葉綠素?zé)晒鈪?shù)檢測
4 討論
    4.1 番茄C2H2型鋅指轉(zhuǎn)錄因子家族生物信息學(xué)分析
    4.2 番茄C2H2型轉(zhuǎn)錄因子家族基因表達(dá)分析
    4.3 番茄SlZF-36基因沉默載體遺傳轉(zhuǎn)化分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：4039559