發(fā)布時間：2024-12-19 02:08

　　 【目的】研究PPO基因在栗仁受熱褐變物質(zhì)代謝中的生理功能�！痉椒ā吭趯Π謇豕麑嵽D(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ)上,獲得1條PPO unigenes,克隆并對其進行生物信息學(xué)分析�！窘Y(jié)果】克隆PPO基因完整開放閱讀框1794 bp,命名為CmPPO,編碼597個氨基酸,屬于絡(luò)氨酸酶基因家族蛋白,包含絡(luò)氨酸普通中心區(qū)域和多酚氧化酶中間保守域。CmPPO編碼的多酚氧化酶屬于親水性蛋白質(zhì),相對分子量66 335.38,理論等電點(pI)6.45,屬于酸性蛋白,不存在跨膜區(qū),不屬于膜結(jié)合蛋白。CmPPO蛋白酶的二級結(jié)構(gòu)α-螺旋比例21.22%,無規(guī)則卷曲59.13%,延伸主鏈15.91%,β-轉(zhuǎn)角3.85%。三級空間結(jié)構(gòu)模型分析與薔薇科蘋果絡(luò)氨酸酶結(jié)構(gòu)(MdPPO1)有72.75%的序列一致度,53%的序列相似度,氨基酸序列一致性達到68.43%,推測它們具有類似功能。通過qRT-PCR驗證,CmPPO基因在板栗不同品種、果實不同組織中表達差異與果實褐變度不一致,在弱褐變品種中表達卻最高�！窘Y(jié)論】褐變不是單基因控制,而是多基因、多種代謝途徑共同參與作用的結(jié)果。

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【部分圖文】：

圖7 PPO基因在板栗不同品種、不同組織中表達分析

圖6PPO基因系統(tǒng)發(fā)育樹3討論

圖1 CmPPO基因cDNA序列及編碼氨基酸

蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈氨基酸殘基借助氫鍵折疊和盤繞形成的α-螺旋、β-折疊、無規(guī)則卷曲以及模體等組件,其中,α-螺旋和β-折疊是最常見的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)[21]。無規(guī)則卷曲和α-螺旋是板栗仁PPO蛋白二級結(jié)構(gòu)的主要結(jié)構(gòu)元件,其次是β-折疊和β-轉(zhuǎn)角。CmPPO二級結(jié)構(gòu)SOP....

圖2 CmPPO編碼氨基酸保守性分析

圖1CmPPO基因cDNA序列及編碼氨基酸應(yīng)用在線三級結(jié)構(gòu)預(yù)測軟件Swiss-Model(https://swissmodel.expasy.org/),選取其自動建模功能對板栗CmPPO蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)模型進行同源建模分析(圖5),結(jié)果發(fā)現(xiàn)與蘋果絡(luò)氨酸酶結(jié)構(gòu)(MdPPO1)....

圖3 蛋白親疏水性分析

板栗CmPPO基因編碼的氨基酸序列與其他物種PPO基因編碼的氨基酸序列進行Blast比對,發(fā)現(xiàn)CmPPO氨基酸序列與其他已知的9種植物的PPO氨基酸序列一致性在41.13%～68.43%(表1),其中與薔薇科蘋果PPO氨基酸序列一致性達到68.43%,與菠菜PPO氨基酸序....

本文編號：4017485