生物胺形成是酸魚(yú)重要的安全隱患,腸細(xì)菌是非常重要的產(chǎn)生物胺菌,其分泌多種氨基酸脫羧酶脫羧對(duì)應(yīng)氨基酸產(chǎn)生相應(yīng)的生物胺。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)鮮魚(yú)中產(chǎn)胺微生物研究較多,但對(duì)于發(fā)酵魚(yú)制品中發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)胺微生物研究較少。本研究通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)戏磻?yīng)(PCR)對(duì)中國(guó)傳統(tǒng)發(fā)酵酸魚(yú)中腸細(xì)菌進(jìn)行氨基酸脫羧酶基因多樣性檢測(cè),利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)檢測(cè)生物胺含量;研究了pH對(duì)腸細(xì)菌產(chǎn)生物胺類(lèi)型和能力的影響,以及酸脅迫下各產(chǎn)胺途徑的關(guān)系;研究K.aerogenes 10C2組氨酸脫羧酶的酶學(xué)性質(zhì);研究K.aerogenes10C2組氨酸脫羧酶基因克隆和生物信息學(xué)分析。具體內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)本研究測(cè)定了酸魚(yú)中97株腸細(xì)菌的生物胺形成能力。研究結(jié)果表明,97株菌產(chǎn)大量腐胺、尸胺、組胺。將97株菌按產(chǎn)生物胺能力的強(qiáng)弱分為4個(gè)等級(jí),大腸菌產(chǎn)腐胺最多,其次是組胺、尸胺。在產(chǎn)腐胺方面,產(chǎn)腐胺含量大于900 mg/l的占33.0%(32/97),產(chǎn)腐胺含量大于500 mg/l的占81.4%(79/97)。產(chǎn)組胺含量在100-500 mg/L之間占41.2%(40/97)。然而,沒(méi)有一個(gè)產(chǎn)尸胺大于500 mg/L的,產(chǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖5-8 hdc-1的跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

跨膜受體是參與細(xì)胞與外界通信的特殊整合膜蛋白,在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。向TMHMMServerv.2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)網(wǎng)站提交hdc-1的氨基酸序列,結(jié)果見(jiàn)Fig.5-8。由圖可知,跨膜螺旋區(qū)(TMHs....

圖5-9 hdc-1的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位對(duì)我們研究蛋白提取方式及其它研究及其重要,只有搞清楚該酶為胞內(nèi)酶還是胞外酶,我們才能更好的制定酶的提取方式和擬定注意事項(xiàng)。Cell-PLoc2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)是一款快速預(yù)測(cè)....

圖5-10 hdc-1的亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)

圖5-9hdc-1的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)5.3.11pET15b/hdc-1的重組質(zhì)粒構(gòu)建

圖5-11 p ET 15b載體圖譜

NdeI/XhoI作為酶切位點(diǎn),將目的基因片段hdc-1和pet15b進(jìn)行雙酶切。將酶切后的hdc-1和pet15b連接過(guò)夜,連接液電轉(zhuǎn)化至TOP10感受態(tài)細(xì)胞,將菌液涂布至含有抗生素的LA培養(yǎng)基,37℃下倒置培養(yǎng)過(guò)夜,篩選陽(yáng)性克隆體。提取其質(zhì)粒,用NdeI和XhoI酶進(jìn)行....

本文編號(hào)：4019844