生物胺形成是酸魚重要的安全隱患,腸細菌是非常重要的產(chǎn)生物胺菌,其分泌多種氨基酸脫羧酶脫羧對應(yīng)氨基酸產(chǎn)生相應(yīng)的生物胺。目前國內(nèi)外對鮮魚中產(chǎn)胺微生物研究較多,但對于發(fā)酵魚制品中發(fā)酵過程中產(chǎn)胺微生物研究較少。本研究通過聚合酶鏈氏反應(yīng)(PCR)對中國傳統(tǒng)發(fā)酵酸魚中腸細菌進行氨基酸脫羧酶基因多樣性檢測,利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)檢測生物胺含量;研究了pH對腸細菌產(chǎn)生物胺類型和能力的影響,以及酸脅迫下各產(chǎn)胺途徑的關(guān)系;研究K.aerogenes 10C2組氨酸脫羧酶的酶學(xué)性質(zhì);研究K.aerogenes10C2組氨酸脫羧酶基因克隆和生物信息學(xué)分析。具體內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)本研究測定了酸魚中97株腸細菌的生物胺形成能力。研究結(jié)果表明,97株菌產(chǎn)大量腐胺、尸胺、組胺。將97株菌按產(chǎn)生物胺能力的強弱分為4個等級,大腸菌產(chǎn)腐胺最多,其次是組胺、尸胺。在產(chǎn)腐胺方面,產(chǎn)腐胺含量大于900 mg/l的占33.0%(32/97),產(chǎn)腐胺含量大于500 mg/l的占81.4%(79/97)。產(chǎn)組胺含量在100-500 mg/L之間占41.2%(40/97)。然而,沒有一個產(chǎn)尸胺大于500 mg/L的,產(chǎn)...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖5-8 hdc-1的跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測

跨膜受體是參與細胞與外界通信的特殊整合膜蛋白,在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。向TMHMMServerv.2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)網(wǎng)站提交hdc-1的氨基酸序列,結(jié)果見Fig.5-8。由圖可知,跨膜螺旋區(qū)(TMHs....

圖5-9 hdc-1的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測

蛋白質(zhì)的亞細胞定位對我們研究蛋白提取方式及其它研究及其重要,只有搞清楚該酶為胞內(nèi)酶還是胞外酶,我們才能更好的制定酶的提取方式和擬定注意事項。Cell-PLoc2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)是一款快速預(yù)測....

圖5-10 hdc-1的亞細胞定位預(yù)測

圖5-9hdc-1的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測5.3.11pET15b/hdc-1的重組質(zhì)粒構(gòu)建

圖5-11 p ET 15b載體圖譜

NdeI/XhoI作為酶切位點,將目的基因片段hdc-1和pet15b進行雙酶切。將酶切后的hdc-1和pet15b連接過夜,連接液電轉(zhuǎn)化至TOP10感受態(tài)細胞,將菌液涂布至含有抗生素的LA培養(yǎng)基,37℃下倒置培養(yǎng)過夜,篩選陽性克隆體。提取其質(zhì)粒,用NdeI和XhoI酶進行....

本文編號：4019844