目的利用成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列(CRISPR)/重組CRISPR相關(guān)核酸酶9(Cas9)技術(shù)雙切口法制備成對(duì)框基因2(Pax2)敲除小鼠,為探討Pax2基因在多個(gè)系統(tǒng)發(fā)育的作用提供動(dòng)物模型。方法根據(jù)Pax2基因序列設(shè)計(jì)sgRNA,設(shè)計(jì)出的sgRNA和Cas9體外轉(zhuǎn)錄后顯微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,F0代小鼠出生后取其基因DNA測(cè)序鑒定基因型。共獲得8只F0代小鼠,使敲除成功的F0代小鼠與野生C57BL/6J小鼠交配,獲得F1代小鼠,后均采用基因成功敲除的小鼠與C57BL/6J小鼠進(jìn)行交配,可獲得穩(wěn)定的Pax2基因敲除小鼠。結(jié)果成功獲得可穩(wěn)定繁殖的Pax2雜合子基因敲除小鼠,其Pax2基因缺失1628 bp;組織HE染色顯示,敲除小鼠的腎小球數(shù)量明顯減少; Western blotting結(jié)果顯示,敲除小鼠的腎皮質(zhì)Pax2蛋白表達(dá)較野生型小鼠減少。結(jié)論利用CRISPR/Cas9技術(shù)可成功構(gòu)建Pax2雜合子基因敲除小鼠,為進(jìn)一步研究Pax2基因的作用奠定基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
材料和方法
    1．材料
    2．方法
        2.1 F0代小鼠的生成:
        2.2 F0代小鼠鑒定:
        2.3 Pax2雜合子基因缺失小鼠的繁育:
        2.4小鼠組織HE染色:
        2.5 Western blotting檢測(cè):
    3．結(jié)果分析
結(jié)果
    1．成功構(gòu)建Pax2雜合子基因缺失小鼠
    2.Pax2雜合子基因缺失小鼠的生長(zhǎng)繁殖
    3. Pax2雜合子基因缺失小鼠腎臟發(fā)育障礙
    4. Pax2雜合子基因缺失小鼠腎皮質(zhì)Pax2蛋白表達(dá)減少
討論



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