【目的】在活體水平驗(yàn)證飛蝗Locusta migratoria羧酸酯酶基因LmCesA1和LmCesA2是否參與有機(jī)磷殺蟲劑的代謝解毒�！痉椒ā坎捎肎al4/UAS系統(tǒng),借助轉(zhuǎn)基因技術(shù),構(gòu)建兩個(gè)轉(zhuǎn)基因黑腹果蠅Drosophila melanogaster品系,選取3品系Gal4(act-Gal4, tub-Gal4和c601-Gal4)果蠅作為母本分別與兩種轉(zhuǎn)基因果蠅(UAS-LmCesA1和UAS-LmCesA2)以及一種親本對(duì)照果蠅(RB0006{y v; attP40, y+})進(jìn)行雜交。對(duì)子一代轉(zhuǎn)基因果蠅從DNA和RNA水平進(jìn)行驗(yàn)證,篩選出成功構(gòu)建的品系。采用生物測(cè)定方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因果蠅與Gal4果蠅雜交后代對(duì)馬拉硫磷的抗性。【結(jié)果】轉(zhuǎn)基因果蠅DNA水平鑒定結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因果蠅tub>LmCesA1和tub>LmCesA2中分別擴(kuò)增到目的基因LmCesA1和LmCesA2,而對(duì)照組果蠅tub>attP40中未擴(kuò)增到目的基因。轉(zhuǎn)基因果蠅RNA水平的檢測(cè)結(jié)果顯示,這兩個(gè)基因在相應(yīng)的雜交后代中均有表達(dá),表明轉(zhuǎn)基因果蠅構(gòu)建成功。目的基因在轉(zhuǎn)基因果蠅成蟲不同組織中的表達(dá)結(jié)...

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圖1 轉(zhuǎn)基因黑腹果蠅DNA水平的鑒定結(jié)果

以DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,LmCesA1和LmCesA2的PCR產(chǎn)物的長度分別為1648bp和1525bp,由圖1可知,轉(zhuǎn)基因果蠅tub>LmCesA1和tub>LmCesA2中均能擴(kuò)增到目的基因,而對(duì)照組果蠅tub>attP40中未擴(kuò)增到目的基因。測(cè)序結(jié)果顯示插入的....

圖2 轉(zhuǎn)基因黑腹果蠅RNA水平的鑒定結(jié)果

c601-Gal4在果蠅中腸上皮細(xì)胞中高表達(dá),本研究采用RT-qPCR方法鑒定了目的基因LmCesA1和LmCesA2分別在轉(zhuǎn)基因果蠅c601>LmCesA1和c601>LmCesA2成蟲不同組織部位(腦、表皮和腸道)中的表達(dá)情況。由圖3可知,兩個(gè)目的基因LmCesA1和LmCe....

圖3 LmCesA1(A)與LmCesA2(B)基因在轉(zhuǎn)基因黑腹果蠅成蟲不同組織中的表達(dá)譜

圖2轉(zhuǎn)基因黑腹果蠅RNA水平的鑒定結(jié)果2.3轉(zhuǎn)基因果蠅對(duì)馬拉硫磷的耐受性

本文編號(hào)：4013938