為研究NO對乳腺癌細胞遷移能力的影響及其分子機制,本研究首先用梯度濃度NO供體SNP處理乳腺癌細胞MCF-7,MTT法檢測細胞活性,發(fā)現(xiàn)高濃度SNP抑制細胞增殖;PI-AnnexinV和Hoechst細胞核染色檢測結(jié)果顯示,高濃度NO促進細胞凋亡.用低濃度SNP處理細胞,劃痕愈合及小室遷移實驗結(jié)果顯示,低濃度SNP促進細胞遷移;RT-qPCR和Westernblot結(jié)果顯示,低濃度SNP上調(diào)轉(zhuǎn)錄調(diào)控輔因子MRTF-A及其下游的遷移相關(guān)基因MYL9、MYH9和CYR61的表達.在MCF-7細胞敲低NOS2基因同樣導(dǎo)致MRTF-A、MYL9、MYH9及CYR61表達下降;敲低MRTF-A則SNP不再促進上述遷移相關(guān)基因的表達.以上實驗結(jié)果提示:NO的腫瘤生物學(xué)效應(yīng)與NO濃度密切相關(guān),細胞內(nèi)源性或外源性低濃度NO可能通過刺激遷移相關(guān)基因表達而促進乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移,而MRTF-A參與了NO誘導(dǎo)的遷移相關(guān)基因表達.

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【部分圖文】：

圖1 SNP處理后細胞培養(yǎng)基中NO含量測定

為了確定SNP作為細胞外NO供體的有效性，利用Griess法檢測加SNP24h后培養(yǎng)基中NO含量，結(jié)果如圖1所示．與未加藥組相比，不同濃度SNP均可以釋放NO，且NO含量隨著加入SNP濃度升高而增加，確定了SNP作為NO供體藥物的有效性．為觀察SNP對MCF-7細胞活性的影響....

圖2 SNP對MCF-7細胞增殖的影響

為觀察SNP對MCF-7細胞活性的影響，進行MTT實驗，結(jié)果如圖2所示．當(dāng)SNP濃度低于0.5mmol/L時，對MCF-7細胞活性無顯著抑制；但SNP濃度高于0.5mmol/L時，活細胞數(shù)量明顯下降．這表明高濃度NO抑制MCF-7細胞增殖．2.2高濃度NO對MCF-7細胞凋....

圖3 高濃度SNP對MCF-7細胞凋亡的影響

為了進一步確定SNP誘導(dǎo)MCF-7細胞凋亡，采用Hoechst染色觀察高濃度SNP對細胞核形態(tài)的影響，結(jié)果如圖4所示．圖4Hoechst染色觀察細胞核內(nèi)DNA聚集狀態(tài)

圖4 Hoechst染色觀察細胞核內(nèi)DNA聚集狀態(tài)

圖3高濃度SNP對MCF-7細胞凋亡的影響用1mmol/L或2mmol/LSNP處理后，MCF-7細胞核明顯皺縮，DNA在核膜下聚集并出現(xiàn)“冒狀”結(jié)構(gòu)，提示細胞凋亡發(fā)生．Hoechst染色結(jié)果和PI-AnnexinV檢測結(jié)果一致，證實NO供體SNP濃度高于0.5mmo....

本文編號：4013199