DNA損傷是由外在環(huán)境因素或機(jī)體內(nèi)在因素導(dǎo)致的機(jī)體細(xì)胞DNA結(jié)構(gòu)的改變。DNA損傷類型有多種,包括DNA堿基的突變與缺失、DNA單鏈斷裂、DNA雙鏈斷裂等。為了保護(hù)基因組的穩(wěn)定性,機(jī)體內(nèi)存在著響應(yīng)和修復(fù)DNA損傷的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò),稱之為DNA損傷應(yīng)答。發(fā)生DNA損傷后,DNA損傷應(yīng)答被激活,一系列基因的轉(zhuǎn)錄受到調(diào)控,使細(xì)胞周期發(fā)生阻滯,進(jìn)行DNA損傷修復(fù)。當(dāng)DNA損傷不能被完全修復(fù)時(shí),存在DNA損傷的細(xì)胞發(fā)生凋亡。DNA損傷應(yīng)答的異常會導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生一系列的疾病。研究表明,DNA損傷應(yīng)答不但需要蛋白質(zhì)編碼基因的參與,也需要非編碼RNA基因的參與。非編碼RNA曾經(jīng)認(rèn)為是“垃圾RNA”,隨著研究的深入,非編碼RNA的功能逐漸被揭示,在生命活動中發(fā)揮著廣泛的調(diào)控作用。miRNA是非編碼RNA的一種,最早發(fā)現(xiàn)于1993年,在線蟲中鑒定發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)miRNA。miRNA主要通過“種子序列”與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因的表達(dá)或降解靶基因。miRNA在參與DNA損傷應(yīng)答時(shí),主要表現(xiàn)為DNA損傷后被誘導(dǎo)表達(dá),或參與DNA損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)、DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞凋亡。對于...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
(一)前言
(二)材料和方法
    1. 材料
        1.1 果蠅品系
        1.2 引物
        1.3 miRNA mimics
        1.4 工具質(zhì)粒
        1.5 細(xì)胞
        1.6 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.7 實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 果蠅培養(yǎng)
        2.3 EdU檢測
        2.4 圖像數(shù)據(jù)分析
        2.5 單只果蠅PCR檢測
        2.6 提取果蠅基因組DNA
        2.7 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.8 S2細(xì)胞培養(yǎng)
        2.9 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. 30 株miRNA突變果蠅對DNA損傷敏感
    2. miR-986^KO和miR-968-1002^KO果蠅株出現(xiàn)DNA損傷誘導(dǎo)的S期檢驗(yàn)點(diǎn)缺陷
    3. miR-284^KO和miR-995^KO果蠅株果蠅株出現(xiàn)DNA損傷誘導(dǎo)的S期檢驗(yàn)點(diǎn)增強(qiáng)
    4. miR-968 靶向expanded
        4.1 miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因分析
        4.2 構(gòu)建miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因質(zhì)粒
        4.3 miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因的驗(yàn)證
        4.4 突變expanded 3′UTR中miR-968 種子序列識別位點(diǎn)
    5. miR-986,miR-968,miR-1002 共突變果蠅無更嚴(yán)重的S期檢驗(yàn)點(diǎn)缺陷
(四)討論
(五)結(jié)論
(六)參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4010023