發(fā)布時間：2024-11-02 19:35

　　DNA損傷是由外在環(huán)境因素或機體內(nèi)在因素導致的機體細胞DNA結(jié)構(gòu)的改變。DNA損傷類型有多種,包括DNA堿基的突變與缺失、DNA單鏈斷裂、DNA雙鏈斷裂等。為了保護基因組的穩(wěn)定性,機體內(nèi)存在著響應和修復DNA損傷的復雜網(wǎng)絡,稱之為DNA損傷應答。發(fā)生DNA損傷后,DNA損傷應答被激活,一系列基因的轉(zhuǎn)錄受到調(diào)控,使細胞周期發(fā)生阻滯,進行DNA損傷修復。當DNA損傷不能被完全修復時,存在DNA損傷的細胞發(fā)生凋亡。DNA損傷應答的異常會導致機體發(fā)生一系列的疾病。研究表明,DNA損傷應答不但需要蛋白質(zhì)編碼基因的參與,也需要非編碼RNA基因的參與。非編碼RNA曾經(jīng)認為是“垃圾RNA”,隨著研究的深入,非編碼RNA的功能逐漸被揭示,在生命活動中發(fā)揮著廣泛的調(diào)控作用。miRNA是非編碼RNA的一種,最早發(fā)現(xiàn)于1993年,在線蟲中鑒定發(fā)現(xiàn)了第一個miRNA。miRNA主要通過“種子序列”與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因的表達或降解靶基因。miRNA在參與DNA損傷應答時,主要表現(xiàn)為DNA損傷后被誘導表達,或參與DNA損傷信號轉(zhuǎn)導、細胞周期檢驗點、DNA損傷修復和細胞凋亡。對于...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
(一)前言
(二)材料和方法
    1. 材料
        1.1 果蠅品系
        1.2 引物
        1.3 miRNA mimics
        1.4 工具質(zhì)粒
        1.5 細胞
        1.6 實驗試劑
        1.7 實驗儀器
    2. 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 果蠅培養(yǎng)
        2.3 EdU檢測
        2.4 圖像數(shù)據(jù)分析
        2.5 單只果蠅PCR檢測
        2.6 提取果蠅基因組DNA
        2.7 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.8 S2細胞培養(yǎng)
        2.9 雙熒光素酶報告實驗
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
(三)實驗結(jié)果
    1. 30 株miRNA突變果蠅對DNA損傷敏感
    2. miR-986^KO和miR-968-1002^KO果蠅株出現(xiàn)DNA損傷誘導的S期檢驗點缺陷
    3. miR-284^KO和miR-995^KO果蠅株果蠅株出現(xiàn)DNA損傷誘導的S期檢驗點增強
    4. miR-968 靶向expanded
        4.1 miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因分析
        4.2 構(gòu)建miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因質(zhì)粒
        4.3 miR-986,miR-968,miR-1002 靶基因的驗證
        4.4 突變expanded 3′UTR中miR-968 種子序列識別位點
    5. miR-986,miR-968,miR-1002 共突變果蠅無更嚴重的S期檢驗點缺陷
(四)討論
(五)結(jié)論
(六)參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：4010023