RNA結(jié)合蛋白通過調(diào)控選擇性剪接、mRNA的穩(wěn)定性等方式對于轉(zhuǎn)錄后調(diào)控起重要作用。Rbm24(RNA-Binding protein24)是RNA結(jié)合蛋白家族成員之一,在不同物種中序列高度保守,并在心臟、骨骼肌等組織中高表達。研究發(fā)現(xiàn),Rbm24在心臟、骨骼肌的分化發(fā)育過程中起到重要作用,近年來,隨著研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)Rbm24在其他組織器官及疾病中也可能具有重要功能。構(gòu)建Rbm24基因敲除小鼠模型可對Rbm24的功能進行更深入的研究。但Rbm24基因敲除小鼠具有胚胎致死性,為進一步研究Rbm24在成體小鼠的組織器官與疾病中的作用,實現(xiàn)Rbm24時空特異性敲除,我們利用Cre-loxP敲除系統(tǒng)構(gòu)建Tamoxifen誘導(dǎo)的全身性Rbm24基因敲除小鼠。誘導(dǎo)性Cre-loxP系統(tǒng)可將某個基因在特定時期或特定組織中進行誘導(dǎo)敲除,是基因在特定組織與時期的功能研究的強有力工具。利用同源重組法構(gòu)建Rbm24loxp/loxp小鼠,與R26CreER小鼠交配,獲得F1代雙雜合小鼠,F1代小鼠自交獲得誘導(dǎo)性全身敲除Rbm24基因的小鼠。通過基因型鑒定選擇帶有cre與同向loxP/loxP位點的小鼠進行...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 RNA結(jié)合蛋白研究進展
        1.1.1 RNA結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 RNA結(jié)合蛋白功能研究進展
    1.2 Rbm24基因研究進展
        1.2.1 Rbm24基因的結(jié)構(gòu)與分布
        1.2.2 Rbm24基因的功能
    1.3 基因敲除技術(shù)概論
        1.3.1 基于位點特異性重組基因敲除技術(shù)
        1.3.2 基于同源重組的基因敲除技術(shù)
        1.3.3 其他基因敲除技術(shù)
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 PCR與Real-time PCR引物
        2.1.3 抗體
    2.2 實驗儀器
    2.3 常用試劑耗材
    2.4 實驗內(nèi)容與方法
        2.4.1 基因分型
        2.4.2 組織總RNA提取
        2.4.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.4.4 熒光實時定量PCR
        2.4.5 組織蛋白的提取
        2.4.6 BCA定量
        2.4.7 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.4.8 組織固定脫水及石蠟包埋
        2.4.9 石蠟切片、貼片與烤片
        2.4.10 伊紅-蘇木素染色(HE染色)
        2.4.11 Masson染色
第三章 結(jié)果分析
    3.1 Rbm24的表達定量
    3.2 Rbm24^loxP/loxP小鼠的構(gòu)建
    3.3 誘導(dǎo)全身性Rbm24基因敲除小鼠的構(gòu)建
    3.4 誘導(dǎo)性Rbm24基因敲除小鼠基因型鑒定
    3.5 蛋白水平鑒定誘導(dǎo)敲除效率
    3.6 Rbm24誘導(dǎo)性基因敲除小鼠外形觀察及體重分析
    3.7 誘導(dǎo)敲除Rbm24基因?qū)е滦∈笮墓δ芗靶呐K結(jié)構(gòu)發(fā)生改變
        3.7.1 Rbm24敲除后小鼠心功能下降
        3.7.2 Rbm24敲除小鼠心臟形態(tài)發(fā)生改變
        3.7.3 Rbm24敲除后小鼠心臟出現(xiàn)纖維化
    3.8 誘導(dǎo)敲除Rbm24導(dǎo)致下游基因異常剪接
第四章 總結(jié)與討論
參考文獻
致謝



本文編號：4008590