【目的】利用慢病毒介導(dǎo)過表達(dá)技術(shù),明確小鼠K26和KAP26.1基因過表達(dá)后對角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白基因KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1和對骨形態(tài)發(fā)生蛋白基因BMP-4、BMPR-IB的影響,探究小鼠絨毛細(xì)度變化的影響機(jī)制,達(dá)到人為調(diào)控(如慢病毒載體技術(shù))使相關(guān)基因過表達(dá),改善動物絨毛品質(zhì)的目的,為哺乳動物絨毛細(xì)度調(diào)控的研究奠定理論基礎(chǔ),【方法】試驗(yàn)在遼寧省生物技術(shù)與分子藥物研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成,小白鼠采自大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,選取出生后5周齡昆明種雄鼠。在Genebank查找到小鼠基因K26(Gene ID:NM₀01033397)及KAP26.1(Gene ID:NM₀27105.2)序列,根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物,將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入生長狀態(tài)良好的293T細(xì)胞,構(gòu)建小鼠K26和KAP26.1基因慢病毒過表達(dá)載體,將含有目的基因K26及KAP26.1的慢病毒表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染小鼠皮膚成纖維細(xì)胞,用熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染情況,確定慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染成功后,從病毒感染后的細(xì)胞中抽提總RNA,將RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA后放入Eppendor...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 主要材料與試劑
    1.2 皮膚樣品采集及細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 小鼠目的基因的過表達(dá)慢病毒包裝及測定
        1.3.1 質(zhì)粒準(zhǔn)備
        1.3.2 細(xì)胞準(zhǔn)備
        1.3.3 慢病毒包裝
        1.3.4 病毒收獲與濃縮
        1.3.5 慢病毒滴度測定(q PCR法)
    1.4 目的病毒及陰性對照慢病毒感染目的細(xì)胞
    1.5 從病毒感染后的細(xì)胞中抽提總RNA
    1.6 RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA
    1.7 Real-time PCR檢測目的基因
2 結(jié)果
    2.1 小鼠目的基因載體構(gòu)建
    2.2 小鼠目的基因的過表達(dá)慢病毒包裝
    2.3 小鼠目的基因過表達(dá)后對其他相關(guān)基因的影響
3 討論
    3.1 K26和KAP26.1基因過表達(dá)
    3.2 K26和KAP26.1基因過表達(dá)對其它角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白的影響
    3.3 K26和KAP26.1基因過表達(dá)對BMP信號通路的影響
4 結(jié)論



本文編號：3981444