目的:探討在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中,與PRL-3啟動(dòng)子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子TFEB對(duì)PRL-3的調(diào)控作用,從而在基因的轉(zhuǎn)錄層面,明確PRL-3在胃癌中高表達(dá)的分子機(jī)制。方法:首先,通過(guò)生物信息學(xué)等方法,分析了PRL-3的轉(zhuǎn)錄本及啟動(dòng)子情況,再通過(guò)預(yù)測(cè)PRL-3啟動(dòng)子區(qū)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),獲得目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子TFEB。進(jìn)而構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子TFEB的pcDNA3.1的表達(dá)重組體。其次,利用單熒光素酶報(bào)告技術(shù)、雙熒光素酶報(bào)告技術(shù)、過(guò)表達(dá)以及siRNA干擾技術(shù),來(lái)研究轉(zhuǎn)錄因子TFEB對(duì)PRL-3啟動(dòng)子的調(diào)控作用。再利用染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)方法研究轉(zhuǎn)錄因子TFEB與PRL-3啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合情況,以證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子TFEB對(duì)PRL-3啟動(dòng)子具有調(diào)控作用。結(jié)果:PRL-3具有多個(gè)轉(zhuǎn)錄本,啟動(dòng)子區(qū)主要在2個(gè)區(qū)域,第一外顯子上游啟動(dòng)子區(qū)和第一內(nèi)含子內(nèi)啟動(dòng)子區(qū)。第一外顯子上游啟動(dòng)子比第一內(nèi)含子內(nèi)啟動(dòng)子活性高很多,第一外顯子上游啟動(dòng)子的核心區(qū)域?yàn)?1bp^-445 bp。轉(zhuǎn)錄因子TFEB對(duì)PRL-3第一外顯子上游啟動(dòng)子有正向調(diào)控作用,且與PRL-3第一外顯子上游啟動(dòng)子的核心區(qū)域有直接結(jié)合,結(jié)合位點(diǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重組質(zhì)粒,由上海吉?jiǎng)P生物技術(shù)有限公司構(gòu)建完成

4圖2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重組質(zhì)粒,由上海吉?jiǎng)P生物技術(shù)有限公司構(gòu)建3）pGL3-PRL-3-promoter,pGL34.10-PRL-3-promoter重組體由上海有限公司構(gòu)建及保存。4）宿主菌E.col....

圖3-1PRL-3轉(zhuǎn)錄本情況

第3章結(jié)果第3章結(jié)果3.1PRL-3轉(zhuǎn)錄本及啟動(dòng)子情況分析通過(guò)Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）發(fā)現(xiàn)PRL-3（PTP4A3）存在4個(gè)蛋白質(zhì)亞型（173aa，148aa，87aa....

圖3-2PRL-3啟動(dòng)子情況

第3章結(jié)果3.1PRL-3轉(zhuǎn)錄本及啟動(dòng)子情況分析通過(guò)Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）發(fā)現(xiàn)PRL-3（PTP4A3）存在4個(gè)蛋白質(zhì)亞型（173aa，148aa，87aa，70aa），具....

圖3-3胃癌SGC-7901細(xì)胞中PRL-3啟動(dòng)子活性分析

以海腎熒光素酶作為轉(zhuǎn)染效率控制的內(nèi)對(duì)照，再分別測(cè)定雙熒光素酶活性，結(jié)果如圖3-3。研究發(fā)現(xiàn)，第一外顯子上游啟動(dòng)子活性比第一內(nèi)含子內(nèi)啟動(dòng)子活性要高的多。第一外顯子上游啟動(dòng)子不同截短體的活性分析如圖3-4，發(fā)現(xiàn)-1bp~-445bp截短體的啟動(dòng)子活性明顯增強(qiáng)，所以研究確定了第....

本文編號(hào)：3981242